保護(hù)素DX對(duì)ARDS大鼠肺水清除的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　保護(hù)素DX（PDX），作為內(nèi)源產(chǎn)生的脂質(zhì)介質(zhì)，被認(rèn)為在抗炎促消退的過程中起到一定的作用。本文章主要研究PDX對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷模型肺泡液體清除率的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：
　　雄性SD大鼠（250-350 g）,尾靜脈給予LPS14mg/kg建立急性肺損傷模型。8h后，經(jīng)尾靜脈給予PDX（5ug/kg）,BOC-2（脂氧素受體抑制劑，600ng/kg）, RP-cAMP（cAMP抑

2、制劑，5mg/kg）, RP-cGMP（cGMP抑制劑，5.5mg/kg）,LY294002（PI3K抑制劑，3mg/kg）,H89（PKA抑制劑，10mg/kg）,氣管導(dǎo)管緩慢泵入5％Evans Blue標(biāo)記的白蛋白（5mg/kg）,機(jī)械通氣60min后，腹主動(dòng)脈放血處死，開胸取肺?；匚髠?cè)肺內(nèi)的肺泡灌注液測(cè)定肺泡液體清除率（AFC）;右肺取出，適當(dāng)處理備用：HE染色觀察肺組織病理學(xué)變化；檢測(cè)肺組織中ENaC和Na,K-ATPase各

3、亞基蛋白的表達(dá)量以及Na,K-ATPase活性；Elisa檢測(cè)肺組織勻漿中IL-1,IL-10,MPO,TNF-α,cAMP,cGMP的含量；分離大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（ATⅡ），接板后在細(xì)胞中加入PDX（10nm）與LPS（1ug/ml）,共培養(yǎng)6h后，Western Blotting檢測(cè)ENaC和Na,K-ATPase各亞基蛋白的表達(dá)量；激光共聚焦檢測(cè)ENaC和Na,K-ATPase各亞基蛋白的蛋白豐度。
　　結(jié)果：

4、　　在LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷的大鼠模型中，PDX顯著增強(qiáng)AFC，并使肺組織勻漿中的炎癥因子IL-1,IL-10, MPO,TNF-α含量顯著降低（P＜0.01）；另外，PDX顯著增強(qiáng)肺組織中肺泡上皮ENaC和Na,K-ATPase各亞基蛋白的表達(dá)量（P＜0.01）以及Na,K-ATPase活性（P＜0.05）；同樣地，在大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中將PDX(10nM)和LPS(1ug/ml)一起加入培養(yǎng)基共培養(yǎng)6h后，我們發(fā)現(xiàn)ENaC和Na,

5、K-ATPase各亞基蛋白的表達(dá)量及豐度明顯上調(diào)（P＜0.01）；然后，實(shí)驗(yàn)顯示脂氧素受體（ALX）抑制劑(BOC-2)，cAMP阻滯劑(Rp-cAMP)和PI3K阻滯劑(LY294002)阻斷了大鼠的AFC的上調(diào)（P＜0.01）,而蛋白激酶A阻滯劑H89和cGMP阻滯劑(Rp-cGMP)沒有(p＞0.05)。最后，從肺組織的WB的結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)PDX通過抑制Nedd4-2而使磷酸化的Akt(P-Akt)上調(diào)(P＜0.01)。