ALK陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌的免疫組化染色篩查以及EML4-ALK融合亞型異質(zhì)性的研究.pdf

1、過(guò)去十年肺癌患者人數(shù)快速增長(zhǎng)，2015年WHO更新了肺癌分類(lèi)，強(qiáng)調(diào)腫瘤基因改變與組織學(xué)診斷同等重要，以驅(qū)動(dòng)基因靶向治療引領(lǐng)了精準(zhǔn)醫(yī)療的潮流，必將帶來(lái)越來(lái)越多的具有臨床意義的潛在基因的分子檢測(cè)技術(shù)發(fā)展。靶向藥物治療間變性淋巴瘤激酶(ALK)基因融合非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的療效顯著優(yōu)于傳統(tǒng)化療，準(zhǔn)確診斷ALK陽(yáng)性NSCLC為精準(zhǔn)治療的關(guān)鍵，目前中國(guó)分子檢測(cè)開(kāi)展尚處于初期階段，僅少數(shù)醫(yī)院能完成分子診斷，ALK陽(yáng)性NSCLC檢測(cè)方法和診

2、斷流程仍需要不斷結(jié)合臨床現(xiàn)狀進(jìn)一步優(yōu)化。
　　目的:本研究采用多種方法篩選ALK陽(yáng)性NSCLC，分析其臨床病理特征和EML4-ALK融合亞型的異質(zhì)性，提出一套適合中國(guó)國(guó)情的診斷流程。
　　方法:(1)收集566例NSCLC石蠟包埋組織，采用Ventana全自動(dòng)免疫組化染色(Ventana-IHC)、熒光原位雜交(FISH)和序列特異性PCR技術(shù)(RT-PCR)方法檢測(cè)ALK狀態(tài)，分析Ventana-IHC染色的著色模式，總結(jié)

3、ALK陽(yáng)性NSCLC臨床病理特征及治療預(yù)后。(2)采用Ventana-IHC和手工IHC檢測(cè)60例NSCLC，對(duì)比4種不同ALK抗體D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7(OriGene)、5A4(Abcam)聯(lián)合手工IHC檢測(cè)ALK染色情況。(3)采用RT-PCR和測(cè)序檢測(cè)EML4-ALK的融合亞型，分析不同亞型的臨床病理特征及臨床意義。
　　結(jié)果:(1)Ventana-IHC篩查A

4、LK陽(yáng)性NSCLC的檢出率為6.7％(38/566)，與FISH和PCR結(jié)果一致，36例Ventana-IHC異常染色模式經(jīng)驗(yàn)證為ALK融合陰性。年齡≤60歲患者陽(yáng)性率(10.6％)高于＞60歲組(3.5％)，有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05）。無(wú)性別差異，不吸煙者多見(jiàn)(78.9％)，僅1例合并EGFR基因突變。組織形態(tài)上，81.6％為腺癌，其中實(shí)體型伴黏液產(chǎn)生多見(jiàn)(47.4％)，非腺癌包括3例鱗癌、3例腺鱗癌及1例多形性癌。克唑替尼治療緩解率

5、為80％。(2)采用手工IHC方法，4種抗體D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7、5A4染色敏感性分別為93.8％、84.4％、93.8％、56.3％，特異性均100％，與Ventana-IHC染色結(jié)果一致性為96.7％、91.7％、96.7％、76.7％。手術(shù)切除大標(biāo)本的ALK表達(dá)優(yōu)于活檢小標(biāo)本。(3)存檔石蠟包埋組織EML4-ALK融合亞型檢出率為52.8％(19/36)。融合亞型V1

6、(52.6％)最多見(jiàn)，其次V3(31.6％，包括1例V3a、1例V3b、4例V3a+V3b混合)和V2(15.8％)。不同融合亞型與患者臨床特征（年齡、性別、吸煙、部位）、病理形態(tài)（腺癌亞型）以及總生存時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。
　　結(jié)論:(1)ALK陽(yáng)性NSCLC具有獨(dú)特的臨床表現(xiàn)和病理形態(tài)，Ventana-IHC可作為檢測(cè)ALK陽(yáng)性NSCLC首選方法，可優(yōu)先檢測(cè)潛在ALK基因高突變率的肺癌患者。(2)基于已普及且成熟的手工IHC，優(yōu)選