EML4-ALK基因融合位點的結(jié)構(gòu)分析和TNF-α基因-308位點單核苷酸多態(tài)性與肺癌相關(guān)性進行研究.pdf

1、目的：目前肺癌是人類常見的惡性腫瘤之一，在中國因肺癌死亡人數(shù)已經(jīng)居于癌癥死亡率首位。非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC)約占所有肺癌的80％~85%，其中約25%~30%就診時已是疾病晚期，約40%~50%已有遠處轉(zhuǎn)移，因而失去最佳手術(shù)切除機會，全身化療及放療是其主要的治療手段。目前，以鉑類為基礎(chǔ)聯(lián)合第三代抗腫瘤藥物(吉西他濱、長春瑞濱、紫杉類藥物等)的化療方案是晚期NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，

2、但化療有效率也僅為30%~40%，并且很多患者出現(xiàn)嘔吐，脫發(fā)等嚴(yán)重副反應(yīng)，難以耐受。近年針對EGFR和K-ras等突變靶點研究一直火熱，并涌現(xiàn)出許多針對EGFR靶點的藥物，療效顯著。2007年日本學(xué)者Soda等首次發(fā)現(xiàn)EML4-ALK(棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4-間變性淋巴瘤激酶)融合基因，研究發(fā)現(xiàn)其與EGFR和K-ras的突變可能存在不共存現(xiàn)象,提示該基因可能是非小細胞肺癌特異性較高的又一分子靶點。目前針對EML4-ALK基因的融合位點

3、結(jié)構(gòu)研究較少，而其融合機制仍不清楚。本課題的研究目的在于通過對H2228細胞株中EML4-ALK融合基因的融合位點的結(jié)構(gòu)分析，初步探討EML4-ALK基因的融合方式和可能的融合機制。同時，我們亦通過對正常人群和原發(fā)性肺癌患者人群中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）基因-308位點單核苷酸多態(tài)性的檢查，初步對TNF-α基因-308位點單核苷酸的多態(tài)性與原發(fā)性肺癌相關(guān)性進行研究。
　　方法：本課題分為兩部分：第一部分采用巢式PCR擴增EM

4、L4-ALK融合基因并對擴增產(chǎn)物進行測序，然后進行序列拼接，進一步應(yīng)用NCBI-BIAST(National Center for Biotechnology Information)及CENSOR系統(tǒng)分析該基因融合位點的序列結(jié)構(gòu)和發(fā)生融合的可能機制。第二部分應(yīng)用高通量TaqMan-MGB探針技術(shù)對TNF-α-308G/A位點，即rs1800629位點進行基因分型，分析比較447例健康對照者和250例原發(fā)性肺癌患者的基因類型。采用SPS

5、S18.0軟件對數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：1.通過對融合基因的分析，發(fā)現(xiàn)在斷裂點附近存在三個Alu重復(fù)序列，并發(fā)現(xiàn)ALK序列斷裂點附近存在MIR序列。斷裂點周圍存在大量正向重復(fù)序列CTGT,及X元件的互補序列CCAGC，這些序列有可能促進DNA斷裂和末端接合，并激發(fā)附近 ALU序列的重組,并發(fā)現(xiàn)兩個 SNP位點。2.分析結(jié)果顯示TNF-α-308位點基因多態(tài)性在病例組和對照組中的分布頻率具有統(tǒng)計學(xué)意義，（P＜0.05）。其