PSGL-1和血小板通過炎癥反應在鹽敏感性高血壓發(fā)病機制中的研究.pdf

1、目的：
　　鹽敏感性高血壓(Salt-sensitive hypertension)是一種以相對高鹽攝入增加動脈血壓為特征的高血壓類型，其病理機制復雜，嚴重危害人類健康。高血壓發(fā)病機制經過漫長歲月的研究已取得巨大發(fā)展，但鹽敏感性高血壓的具體分子機制仍不是很明確。近年來大量研究提示血小板活化誘導的炎癥反應及內皮功能損傷是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要因素。高血壓患者體內存在血小板功能異常和高度的血小板活化狀態(tài)。高鹽能夠激活血管內皮細胞表達

2、E-選擇素并導致炎癥反應。白細胞表面的PSGL-1是與選擇素結合的配體，它是白細胞與血管內皮細胞黏附、浸潤過程中的關鍵因子。但是白細胞表面PSGL-1和血小板在鹽敏感性高血壓中的作用仍不是很清楚。本實驗旨在探索PSGL-1與血小板介導的炎癥反應和內皮損傷在鹽敏感性高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用及機理。
　　方法：
　　體內實驗1:利用6周齡的PSGL-1基因敲除小鼠及其對照小鼠，分別給予0.4％低鹽和6％高鹽喂養(yǎng)。3月后，頸動脈插管

3、法檢測動脈血壓;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清炎癥因子IL-1β和TNF-α的表達;流式細胞術檢測外周血免疫細胞和血小板-白細胞聚集的比例;免疫組化方法檢測腎臟及皮膚免疫緬胞的浸潤，免疫印跡法檢測腎臟炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達。
　　體內實驗2:選用2月齡鹽敏感性高血壓大鼠(Dahl salt-sensitive，Dahl SS)25只隨機分為三組:給予低鹽(0.12％NaCl，LS)、高鹽(8％NaCl

4、，HS)和血小板抑制劑（8％NaCl+白消安，HS+bus）處理6周。尾袖法檢測大鼠動脈血壓，流式細胞術檢測外周血免疫細胞的和血小板-自細胞聚集百分率及主動脈血管中浸潤的免疫細胞的百分率;免疫組化方法檢測腎臟免疫細胞的浸潤，酶聯(lián)免疫吸附法檢測外周血清中炎癥因子IL-6的表達水平。
　　體外實驗:選用人臍靜脈內皮細胞，用不同濃度鹽處理。流式細胞術檢測內皮細胞表面P-selectin和E-selectin的表達;免疫印跡法檢測炎癥因子

5、IL-1β和NF-κB信號通路蛋白的表達水平。
　　結果：
　　體內實驗1:PSGL-1+/+小鼠高鹽喂養(yǎng)后，較低鹽組動脈血壓顯著增高;血清及腎臟炎癥因子IL-1β和TNF-α的水平顯著增高;外周血中T淋巴細胞比例增多;血小板-白細胞和血小板-T淋巴細胞聚集增多;皮膚小血管和腎臟腎小管間質中炎癥細胞浸潤顯著增多。而PSGL-1-/-小鼠高鹽喂養(yǎng)后并未出現(xiàn)上述體征。
　　體內實驗2:與低鹽組相比，高鹽喂養(yǎng)的Dahl SS

6、大鼠動脈血壓明顯升高，外周血T淋巴細胞、B細胞和NK細胞的數(shù)目，血小板-白細胞聚集和主動脈血管炎癥細胞的比例及腎臟炎癥細胞浸潤顯著增多;血小板抑制劑能夠顯著改善高鹽引起的Dahl SS大鼠上述癥狀。
　　體外實驗:高鹽促進血管內皮細胞表面粘附因子P-selectin和細胞促炎細胞因子IL-1β表達的增加，以及細胞NF-κB信號通路的活化。
　　結論：
　?。ㄒ唬└啕}促進白細胞表面的PSGL-1與血小板聚集，激活炎癥反應