西羅莫司治療難治性純紅細胞再生障礙性貧血的臨床療效及其作用機制的體外探索性研究.pdf

1、純紅細胞再生障礙性貧血(pure red cell aplasia anemia，PRCA)是以嚴重網(wǎng)織紅細胞減少及骨髓中紅系前體細胞顯著減低為特征的貧血綜合征。分為先天性及后天獲得性PRCA。原發(fā)性獲得性PRCA是一種免疫機制干擾紅系分化的自身免疫性疾病，目前對于獲得性PRCA的主要治療方法是環(huán)孢素±激素為主的免疫調(diào)節(jié)治療。然而，部分患者存在環(huán)孢素、激素無效或不耐受，需采用二線治療，常用的二線治療包括環(huán)磷酰胺、CD20單抗、ATG等，

2、但這些治療有些價格非常昂貴，且副作用大，患者難以承受，部分患者依然無效。因此對于難治性純紅細胞再生障礙性貧血患者，需要找到一種新的有效治療方法。西羅莫司是一種免疫抑制劑，目前主要用于移植后病人的免疫調(diào)節(jié)治療;與環(huán)孢素相比，有較小的肝腎毒性。既往國內(nèi)外多篇文獻報道西羅莫司可治療復發(fā)難治自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia，AIHA)，Evans綜合征及自身免疫性淋巴增生綜合征(autoimmune

3、lymphoproliferative syndrome，ALPS)等免疫功能紊亂性疾病，且效果良好。在本研究中，我們對于環(huán)孢素無效或不耐受的難治性PRCA患者，采用西羅莫司治療，觀察其有效率及副反應，并對可能的作用機制進行了探索。
　　目的：
　　明確西羅莫司治療難治性純紅細胞再生障礙性貧血患者的臨床療效及不良反應。進一步觀察西羅莫司治療前后難治性PRCA患者Treg變化及西羅莫司體外對K562細胞系和病人原代干細胞向紅系

4、分化的影響，明確西羅莫司起效的可能機制。
　　方法：
　　回顧性收集自2014年3月至2017年3月北京協(xié)和醫(yī)院血液科采用西羅莫司治療的14例難治性純紅細胞再生障礙性貧血患者的臨床資料并進行整理，觀察西羅莫司的治療療效及不良反應。
　　通過流式檢測PRCA患者治療前CD4+CD25+foxP3+（Treg細胞），以及CD4+T的表達量，比較患者與正常人群中Treg細胞水平表達情況，動態(tài)隨訪這些PRCA患者在西羅莫司治療

5、前后Treg變化情況。定向體外培養(yǎng)K562細胞系及治療前PRCA患者骨髓干/祖細胞，使之向紅系分化，加入西羅莫司，觀察西羅莫司對紅細胞分化的影響。在患者的培養(yǎng)體系中，分別加入患者血清和不同濃度的西羅莫司，觀察紅細胞集落生長的變化。
　　結果：
　　西羅莫司治療難治性PRCA的總有效率為85.7％，中位起效時間為4個月，不良反應發(fā)生率為57.1％;與正常對照相比，PRCA患者外周血中Treg細胞明顯下降，經(jīng)治療后Treg較治療

6、前上調(diào);體外培養(yǎng)K562細胞株，不同濃度梯度西羅莫司作用后對血紅蛋白生成影響不顯著，對紅系表面抗原表達影響不顯著;PRCA患者體外紅系集落生長與正常人無異，無論正常人或PRCA患者，加入西羅莫司組與未加藥物的對照組比較，集落生長無顯著性差異;PRCA患者加入自身血清后，其紅細胞集落生長較未加血清者明顯減少，再次加入不同濃度的西羅莫司后，在1000nM和100nM組，觀察到紅系集落較未加西羅莫司組明顯增加。
　　結論：
　　西