他克莫司對重型再生障礙性貧血患者效應(yīng)T細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的:
　　 體外研究他克莫司(FK506)對重型再生障礙性貧血(SAA)患者骨髓CD8+HLA-DR+T細(xì)胞的抑制作用，SAA患者效應(yīng)T細(xì)胞功能與臨床的相關(guān)性，進(jìn)一步探討SAA的免疫發(fā)病機(jī)制。
　　 方法:
　　 取16例SAA患者骨髓10ml，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液，分離提取單個(gè)核細(xì)胞。
　　 經(jīng)免疫磁珠分選16例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測分選純度在85％以上。計(jì)數(shù)分選的陽性

2、細(xì)胞，以2×105/ml細(xì)胞濃度置于96孔板中，分IL-2組（接種6孔）、FK506組（接種7孔），孵育24小時(shí)后分別加入不同濃度IL-2、FK506，培養(yǎng)48小時(shí)后加入MTT混勻孵育4小時(shí)，離心后吸出培養(yǎng)液，每孔各加入二甲基亞砜(DMSO)搖勻后，酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔的吸光度值(A490nm)測培養(yǎng)孔細(xì)胞增殖。
　　 用淋巴分離液分離上述SAA患者骨髓T淋巴細(xì)胞，將上述所得單個(gè)核細(xì)胞后以5×105/ml細(xì)胞濃度接種于含RPM

3、I-1640培養(yǎng)基的24孔板中，設(shè)空白對照組、IL-2組、FK506組、FK506+CsA組，共培養(yǎng)18小時(shí)后加入佛波酯(PMA)等活化4小時(shí)，用流式細(xì)胞儀測CD8+HLA-DR+T細(xì)胞內(nèi)TNF-β蛋白表達(dá)水平;并進(jìn)一步分析TNF-β表達(dá)量與外周血象及CD4+/CD8+T細(xì)胞比例的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.SAA患者效應(yīng)細(xì)胞CD8+HLA-DR+細(xì)胞純度均在85％以上。
　　 2.隨著IL-2濃度的增加，I

4、L-2組細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的增殖，以IL-2濃度為20、200、2000u/ml組增殖明顯，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。并且FK506可以抑制以上三種濃度IL-2的促增殖作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.CD8+HLA-DR+T細(xì)胞TNF-β平均表達(dá)量在空白組、IL-2組、FK506組、FK506+CsA組分別為:(66.61±16.2)％、（73.36±16.73）％、(47.78±20.

5、09)％、（42.23±21.35）％，IL-2組明顯高于空白對照組，F(xiàn)K506組和FK506+CsA組明顯低于空白對照組，而FK506+CsA組與FK506組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.空白組TNF-β表達(dá)量與患者臨床血象中網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞比例及CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞比例有顯著的相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為:-0.86、0.77、-0.9。
　　 結(jié)論:
　　 1.IL-2能促進(jìn)SAA患者CD

6、8+HLA-DR+T細(xì)胞增殖，F(xiàn)K506能抑制此增殖作用。
　　 2.IL-2能促進(jìn)CD8+HLA-DR+T細(xì)胞分泌高水平的TNF-β，F(xiàn)K506能抑制其分泌;FK506聯(lián)合CsA對CD8+HLA-DR+T細(xì)胞抑制作用與單用FK506作用相當(dāng)。
　　 3.TNF-β表達(dá)量與CD4+/CD8+T細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)，與患者外周血淋巴細(xì)胞比例呈正相關(guān)，與患者網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比呈負(fù)相關(guān)，再次提示TNF-β在CD8+T細(xì)胞對SAA患者