TNFAIP2 通過激活Wnt-β-catenin 信號(hào)通路促進(jìn)食管鱗狀細(xì)胞癌的遷移與增殖.pdf

1、背景：
　　食管癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，食管癌在我國發(fā)病率有明顯的地區(qū)差異，其發(fā)病率及死亡率均居高不下。食管癌在我國以鱗狀細(xì)胞癌常見，其具體發(fā)病原因及機(jī)制仍然不得而知。
　　腫瘤微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著不可或缺的作用，而腫瘤壞死因子α（TNF-α）是腫瘤微環(huán)境中一個(gè)重要的炎癥因子，其可促進(jìn)乳腺癌，結(jié)腸癌，膀胱癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展。TNF-α在食管鱗癌微環(huán)境中對(duì)食管鱗癌的具體作用的研究還未見報(bào)道，因此，我們對(duì)TNF-α

2、下游基因腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2基因（TNFAIP2）在食管鱗癌中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)、研究。可望為食管癌基因治療方面提供可選的靶點(diǎn)，為食管癌的臨床治療提供理論基礎(chǔ)與新的治療方式。
　　方法：
　　1.采用qRT-PCR及免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)癌及癌旁組織中TNFAIP2在基因和蛋白層面的表達(dá)水平。
　　2.采用qRT-PCR篩選高表達(dá)靶基因的食管鱗癌細(xì)胞株，選擇兩株高表達(dá)靶基因的細(xì)胞株，通過上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司在選定

3、的兩株細(xì)胞株中構(gòu)建低表達(dá)靶基因的shRNA慢病毒載體。實(shí)驗(yàn)分組慢病毒介導(dǎo)RNA干擾組（LV-RNAi），空載體組（LV-CON）。
　　3.采用qRT-PCR和Western blot技術(shù)驗(yàn)證靶基因在基因及蛋白層面的干擾效率。
　　4.采用重組人腫瘤壞死因子α（rTNF-α）藥物作用于選定的細(xì)胞株48小時(shí)，運(yùn)用qRT-PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)靶基因的基因及蛋白表達(dá)水平。
　　5.運(yùn)用克隆形成及CCK8方

4、法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力。
　　6.細(xì)胞周期。凋亡檢測(cè)（流式）。
　　7.細(xì)胞遷移及侵襲能力檢測(cè)（Transwell小室法）。
　　8.腫瘤細(xì)胞增殖、周期、遷移，侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè)（Western blot）。
　　9.SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.TNFAIP2在食管鱗癌及癌旁組織中，分別在基因及蛋白水平存在表達(dá)差異，且在癌組織中為高表達(dá)。
　　2.選定細(xì)胞株在基

5、因及蛋白水平的干擾效率超過75%。
　　3.采用rTNF-α作用后，靶基因及蛋白水平均表達(dá)增高。
　　4.克隆形成和CCK8結(jié)果提示：LV-RNAi組較LV-CON組能抑制細(xì)胞增殖；細(xì)胞周期、凋亡結(jié)果提示：LV-RNAi組較LV-CON組，明顯抑制細(xì)胞處于G0/G1期，但對(duì)細(xì)胞凋亡無影響；遷移、侵襲結(jié)果顯示：干擾組較對(duì)照組能抑制癌細(xì)胞的遷移。侵襲能力。
　　5.檢測(cè)到Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白在LV-R

6、NAi組較LV-CON組表達(dá)降低或增高。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)TNFAIP2在食管鱗癌中呈高表達(dá)狀態(tài)，并證實(shí)rTNF-α細(xì)胞因子可促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞株在基因及蛋白水平高表達(dá)靶基因及產(chǎn)物。通過慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，證實(shí)低表達(dá)TNFAIP2對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株的生物學(xué)功能產(chǎn)生明顯影響：抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。
　　對(duì)于TNFAIP2對(duì)食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)功能影響的進(jìn)一步探究，得出TNFAIP2可能