雄激素及其受體調(diào)控ATAD2基因促進(jìn)肝癌的侵襲與遷移.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌（以下簡(jiǎn)稱肝癌）是最常見的惡性腫瘤之一，2015年腫瘤相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)肝癌發(fā)病率占惡性腫瘤的第四位，死亡率占惡性腫瘤的第三位，其中男性發(fā)病率與死亡率較高，男女比例約為3∶1;其中90％為肝細(xì)胞型肝癌，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人民生命健康的惡性腫瘤之一。肝癌的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素，但對(duì)于具體機(jī)制我們還不甚了解。肝細(xì)胞癌發(fā)病率的顯著性別差異表明性激素在發(fā)病機(jī)制中的重要作用。其中，雄激素已經(jīng)被證明可誘導(dǎo)和促進(jìn)肝細(xì)

2、胞癌的發(fā)展，且通過(guò)結(jié)合高親和力的雄激素受體(AR)發(fā)揮生物學(xué)功能。AR屬于核受體家族的成員，可作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控特定基因的表達(dá)。ATAD2基因定位于人染色體8q24.13，在一些腫瘤中參與調(diào)控染色質(zhì)動(dòng)力活性、基因組轉(zhuǎn)錄活性和細(xì)胞凋亡過(guò)程，其表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展。以往有研究表明，在前列腺癌中，ATAD2直接與AR相互作用，并增強(qiáng)AR的活性，在雄激素刺激基礎(chǔ)上，ATAD2和AR一起被招募到特定AR靶基因上并調(diào)節(jié)它們的表達(dá)，從而促進(jìn)

3、前列腺癌的增殖。但是ATAD2與雄激素及AR的相互作用，在肝細(xì)胞癌中的作用及影響還未見報(bào)道。本研究通過(guò)明確雄激素及AR與ATAD2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮的作用，探討對(duì)肝癌生物學(xué)行為的作用機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用STRING(version10.0)軟件預(yù)測(cè)ATAD2與AR的相互作用可能性;分別用RT-PCR與Western-blot方法檢測(cè)不同肝癌細(xì)胞系中ATAD2與AR的表達(dá)量;分別運(yùn)用CCK8、克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲與遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證肝癌

4、細(xì)胞增殖、克隆形成與侵襲、遷移能力;運(yùn)用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中蛋白的分布;運(yùn)用基因芯片檢測(cè)基因表達(dá)量的變化;運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期與凋亡能力;運(yùn)用免疫共沉淀檢測(cè)蛋白間相互作用強(qiáng)度;運(yùn)用免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌組織中蛋白的分布情況，并分析與臨床病理因素間的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.雄激素(DHT)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞系LM3、Huh7增殖、侵襲及遷移能力，并進(jìn)ATAD2基因表達(dá)量增高，且可被雄激素受體拮抗劑(CDX)阻斷;
　　2.在雄

5、激素(DHT)作用下，ATAD2與雄激素受體(AR)可共沉淀;
　　3.在雄激素(DHT)作用下，下調(diào)AR后，ATAD2表達(dá)量降低;下調(diào)ATAD2后，基因芯片顯示APC基因表達(dá)上調(diào);實(shí)驗(yàn)顯示下調(diào)ATAD2后，β-catenin分布改變，靶基因表達(dá)量下調(diào)，EMT相關(guān)基因表達(dá)量改變，細(xì)胞增殖、侵襲與遷移能力下降，促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞周期進(jìn)展;
　　4.肝癌組織AR、ATAD2、β-catenin與臨床病理因素分析顯示，AR與T