高壓氧聯(lián)合氫水用于胸部戰(zhàn)創(chuàng)傷后嚴(yán)重肺損傷治療的基礎(chǔ)研究.pdf

1、1、研究目的：
　　肺損傷是胸部戰(zhàn)創(chuàng)傷中最嚴(yán)重的損傷之一，治療方法有限。高壓氧治療可以迅速增加動(dòng)脈血氧含量、提高PaO2，迅速改善各器官組織缺氧，減少酸性代謝產(chǎn)物，恢復(fù)各器官功能。氫氣是一種優(yōu)質(zhì)的抗氧化物質(zhì)，近幾年，關(guān)于氫氣的抗氧化、抗炎癥反應(yīng)的研究逐漸成為熱點(diǎn)。目前文獻(xiàn)無兩者聯(lián)合治療肺損傷的研究報(bào)道。本研究基于以上的理論基礎(chǔ)和文獻(xiàn)參考，探討兩者聯(lián)合用于戰(zhàn)創(chuàng)性急性肺損傷治療的可行性，并探討相應(yīng)的干預(yù)措施。查閱相關(guān)文獻(xiàn)和多次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)

2、，胸部創(chuàng)傷模型變量多，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大偏差，因此我們利用成熟的呼吸道吸入脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）技術(shù)制造出嚴(yán)重肺損傷模型，利用該模型模擬胸部創(chuàng)傷后急性肺損傷。建模成功后，通過給大鼠單獨(dú)注射氫氣飽和生理鹽水溶液、單獨(dú)高壓氧治療以及聯(lián)合兩者治療的方法，觀察肺組織病理改變及炎細(xì)胞浸潤情況，測(cè)定血清及肺組織中的炎性因子水平、肺組織細(xì)胞凋亡率改變及肺組織中抗氧化酶水平變化。通過以上指標(biāo)的觀察，以確定飽和氫水聯(lián)合高壓

3、氧對(duì)于肺損傷的作用，明確氫水聯(lián)合高壓氧治療對(duì)嚴(yán)重肺損傷的治療意義，為臨床肺損傷治療方法的建立提供理論依據(jù)。
　　2、研究方法：
　　成年雄性Sprague-Dawlay大鼠40只，體重約為(240±10)g，隨機(jī)分成5組（n=8/組），分別為對(duì)照組（sham組）、LPS組、LPS組+高壓氧組(LPS+O2組)、LPS組+飽和氫水組(LP S+H2)組、LPS組+高壓氧+飽和氫水組(LPS+O2+H2)組，每組8只。Sham組

4、氣管內(nèi)注射與實(shí)驗(yàn)組同等劑量的生理鹽水，正常飼養(yǎng);LPS組按體重3mg/kg氣管內(nèi)注射LPS試劑制造肺損傷模型，建模成功后正常飼養(yǎng);LPS+O2組在建模后1小時(shí)給予2.5ATA純氧治療120分鐘，每12小時(shí)治療一次，連續(xù)治療3天;LPS+H2組在建模成功后1小時(shí)，大鼠按體重5ml/kg腹腔內(nèi)注射飽和氫水，每12小時(shí)后重復(fù)腹腔給藥一次，連續(xù)治療3天;LPS+O2+H2組在建模1小時(shí)后，先給予飽和氫水5ml/kg腹腔注射，然后立即把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放

5、入高壓艙給予2.5ATA純氧加壓治療120分鐘，每12小時(shí)給予腹腔注射飽和氫水和高壓氧治療，3日后取標(biāo)本。比較肺組織濕干重比，檢測(cè)各組大鼠血清、肺組織和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平，檢測(cè)血清和肺組織中MDA含量和SOD活性，TUNEL法測(cè)量肺組織內(nèi)細(xì)胞凋亡情況，光鏡下觀察肺組織病理改變，計(jì)算凋亡指數(shù)。
　　3、研究結(jié)果:
　　(1)大鼠肺濕干重比:和LPS組肺組織濕/干比相比，LPS+O2組、LPS+H2

6、組、LPS+O2+H2組的肺組織濕/干比降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，LPS+O2組、LPS+H2組、LPS+O2+H2組之間比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(2)病理觀察:sham組大鼠肺泡腔結(jié)構(gòu)完整、均一，四壁光滑，未見腔內(nèi)有紅白細(xì)胞浸潤。LPS組可見大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺間質(zhì)增厚明顯，間質(zhì)內(nèi)見大量白細(xì)胞，肺泡腔內(nèi)可見出血及白細(xì)胞浸潤。LPS+O2組和LPS+H2組肺泡壁增厚，肺泡及間質(zhì)亦可見白細(xì)胞浸潤，病理評(píng)分低于LPS組。

7、LPS+O2+H2組與LPS+O2組、LPS+H2組之間病理評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(3)肺組織勻漿中MDA含量:LPS+O2組、LPS+H2組、LPS+O2+H2組中MDA含量低于LPS組(P＜0.05)，但各組之間無差異。肺組織中SOD活力:LPS+O2組、LPS+H2組、LPS+O2+H2組活性大于LPS組(P＜0.05)，低于sham組(P＜0.05)。
　　(4)肺組織及血清中TNF-α、IL-1β、IL-6檢測(cè):

8、IL-1β在肺組織及血清中LPS+O2組、LPS+H2組、LPS+O2+H2組中均低于LPS組(P＜0.05)。TNF-α、IL-6在肺組織及血清中差異不明顯，可能與取材時(shí)間有關(guān)。
　　(5)肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β含量:LPS+O2組、LPS+H2組、LPS+O2+H2組中含量低于LPS組(P＜0.05)，高壓氧和氫水組、氫氧聯(lián)合組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(6)細(xì)胞凋亡:LPS組和sham組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜

9、0.0001)，單用氫水、單用高壓氧、氫氧聯(lián)合均與LPS組存在顯著差異(P＜0.05);LPS+H2與LPS+H2+O2亦有顯著差異(P=0.0012＜0.05)，可見氫水聯(lián)合高壓氧治療對(duì)減少細(xì)胞凋亡具有協(xié)同作用。
　　4、結(jié)論：
　　1、富氫鹽水可通過減少致炎因子，促進(jìn)抗氧化酶活性，降低肺組織氧化應(yīng)激，減少肺細(xì)胞凋亡，對(duì)LPS導(dǎo)致的急性肺損傷起到保護(hù)作用。
　　2、高壓氧可通過減輕肺組織炎性物質(zhì)的釋放，減少氧化產(chǎn)物的