Oct4B1基因過表達(dá)增強結(jié)直腸癌SW620細(xì)胞對奧沙利鉑耐藥性及機制研究.pdf

1、目的：
　　探討Oct4B1基因過表達(dá)是否增強結(jié)直腸癌SW620細(xì)胞對化療藥物奧沙利鉑的耐藥性，及其機制是否與誘導(dǎo)細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）有關(guān)。
　　方法：
　　（1）實驗分組實驗組（SW620-Oct4B1）：轉(zhuǎn)染帶G418抗性的Oct4B1過表達(dá)質(zhì)粒；對照組（SW620-NC）：轉(zhuǎn)染帶G418抗性的陰性對照質(zhì)粒。
　　（2）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建瞬時轉(zhuǎn)染后48h，用RT-qPCR檢測Oct4B1 mRNA表達(dá)，

2、明確瞬時轉(zhuǎn)染效果；用G418篩選建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，用RT-qPCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞Oct4B1 mRNA表達(dá)，明確穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效果，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株用于后續(xù)實驗。
　?。?）對兩組細(xì)胞分別作如下檢測：①MTT法檢測細(xì)胞對化療藥物奧沙利鉑的敏感性；②用劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移能力；③用Transwell小室檢測細(xì)胞侵襲能力；④用Western blot法檢測細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、N-鈣黏蛋白（N-cadh

3、erin）表達(dá)及耐藥蛋白P-糖蛋白（P-gp）表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株建立結(jié)果：瞬時轉(zhuǎn)染48h后Oct4B1 mRNA表達(dá)實驗組較對照組提高了1.28倍；用800μg/ml的G418建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞Oct4B1 mRNA表達(dá)水平實驗組較對照組提高了2.1倍，實驗組明顯高于對照組（P<0.01）。
　?。?）對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實驗組及對照組細(xì)胞檢測結(jié)果如下：①奧沙利鉑對兩組細(xì)胞抑制率的結(jié)果顯示

4、：隨奧沙利鉑濃度增加，對兩組細(xì)胞的抑制率也增加，但實驗組較對照組細(xì)胞抑制率均明顯降低（P<0.05）；②劃痕實驗結(jié)果顯示：培養(yǎng)12h兩組在劃線處傷痕愈合率分別為（32.67±0.67）％及（24.00±1.15）%，實驗組明顯高于對照組（P<0.05）；24h兩組在劃線處傷痕愈合率分別為（67.33±1.20）%及（50.00±2.88）%，實驗組顯著高于對照組（P<0.05）；③細(xì)胞侵襲能力結(jié)果顯示：培養(yǎng)24h兩組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（3

5、97.30±11.85）及（202.30±14.68），實驗組顯著多于對照組（P<0.01）；④EMT標(biāo)志物結(jié)果顯示：兩組細(xì)胞上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)分別為（0.20±0.02）及（0.53±0.01），實驗組明顯低于對照組（P<0.01）；而間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin表達(dá)分別為（0.93±0.02）及（0.67±0.02），實驗組顯著高于對照組（P<0.01）；⑤耐藥蛋白P-gp結(jié)果顯示：兩組P-gp表達(dá)分別為（0.42