RPA1基因多態(tài)性在奧沙利鉑治療結(jié)直腸癌敏感性中的研究.pdf

1、結(jié)直腸癌（包括結(jié)腸癌與直腸癌）是世界上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在我國，結(jié)直腸癌的發(fā)病率目前已呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著人類的健康。盡管目前篩查早期結(jié)直腸癌的方法為數(shù)不少，但由于結(jié)直腸癌起病隱匿，大部分患者確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，無法進(jìn)行手術(shù)治療，因而輔助化療已成為結(jié)直腸癌治療中不可或缺的手段之一。
　　奧沙利鉑(oxaliplatin)是第三代鉑類化合物，是目前針對(duì)中晚期結(jié)直腸癌化療聯(lián)合方案的標(biāo)準(zhǔn)藥物之一，其主要原理是通過與脫氧

2、核糖核酸雙鏈共價(jià)結(jié)合形成鏈間交聯(lián)，阻斷腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。核酸切除修復(fù)系統(tǒng)(nucleotide excision repair，NER)是DNA修復(fù)的基本通路，修復(fù)紫外線所致嘧啶二聚體、脫氧核糖核酸加合物、光化合物等累積性損傷，是清除大劑量鉑類藥所引起的脫氧核糖核酸損傷的重要系統(tǒng)。人類基因組計(jì)劃已經(jīng)確認(rèn)，基因的遺傳與變異會(huì)影響基因的結(jié)構(gòu)、功能以及表達(dá)，進(jìn)而改變機(jī)體的生物學(xué)功能。單核苷酸多態(tài)性(single

3、nucleotide polymorphisms，SNPs)是最常見的基因遺傳變異。能夠改變基因結(jié)構(gòu)或調(diào)節(jié)基因表達(dá)量，從而調(diào)控機(jī)體的作用。
　　研究發(fā)現(xiàn)，單個(gè)SNP作用或多個(gè)SNPs間的聯(lián)合作用與腫瘤發(fā)生發(fā)展及預(yù)后顯著相關(guān)。耐藥現(xiàn)象主要產(chǎn)生于修復(fù)系統(tǒng)清除藥物，這是減弱化療藥物療效的主要原因，而DNA修復(fù)基因的SNP密切影響著與修復(fù)系統(tǒng)的修復(fù)能力。迄今為止，已有多篇DNA修復(fù)通路SNPs與腫瘤及結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和化療敏感性研究的報(bào)道

4、。大量研究結(jié)果證實(shí)，NER通路與結(jié)直腸癌化療敏感性以及生存預(yù)后存在潛在的關(guān)聯(lián)。
　　方法:本課題通過對(duì)166例結(jié)直腸癌患者的臨床病例研究，篩選NER通路中可能存在的重要基因遺傳變異，統(tǒng)計(jì)其與結(jié)直腸癌化療敏感性及生存預(yù)后的關(guān)聯(lián)，尋找到相關(guān)的遺傳變異rs5030740及所在基因RPA1。在此基礎(chǔ)上，通過分子生物學(xué)方法研究關(guān)鍵基因RPA1及遺傳變異rs5030740對(duì)腫瘤細(xì)胞的表型影響，進(jìn)而揭示其在奧沙利鉑化療敏感性及生存預(yù)后中的可能機(jī)

5、制，為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌化療敏感性及進(jìn)行個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。
　　結(jié)果:對(duì)166個(gè)以奧沙利鉑為主要治療方式的結(jié)直腸癌患者進(jìn)行化療敏感性及生存預(yù)后與RPA1遺傳變異的關(guān)聯(lián)性分析，尋找到相關(guān)的遺傳變異rs5030740及所在基因RPA1。課題發(fā)現(xiàn)rs5030740位點(diǎn)T等位基因突變到C等位基因與結(jié)直腸癌患者奧沙利鉑化療敏感性降低有關(guān)，并且結(jié)直腸癌患者用藥后無進(jìn)展生存期縮短有關(guān)。此外，本課題組通過網(wǎng)站預(yù)測(cè)，數(shù)據(jù)庫分析，細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)等驗(yàn)證了r

6、s5030740位點(diǎn)的突變導(dǎo)致了miRNA-let-7e-5p與RPA1基因3'-UTR的結(jié)合能力的降低，促使RPA1的表達(dá)量上升。最后，課題組通過一系列細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞增殖、周期及凋亡）進(jìn)一步揭示了RPA1的表達(dá)量升高可增加腫瘤細(xì)胞的增殖能力，減少細(xì)胞凋亡數(shù)目，而這一現(xiàn)象在奧沙利鉑藥物的刺激下，更為明顯。
　　結(jié)論:基因rs5030740的突變可能導(dǎo)致miRNA-let-7e-5p的結(jié)合能力減弱，RPA1的異常高表達(dá)，進(jìn)而通過