Akt-GSK3β信號通路在小鼠子宮內(nèi)膜崩解和修復(fù)過程中的表達(dá)及孕酮調(diào)控.pdf

1、目的：檢測Akt/GSK3β信號通路相關(guān)分子蛋白激酶B（protein kinase B, Akt）、糖原合成激酶3β（Glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）在小鼠生理性孕酮撤退月經(jīng)樣改變過程中子宮角組織的表達(dá),以及分別在月經(jīng)發(fā)生的關(guān)鍵時期前、后（即孕酮撤退后12 h和16 h）回植孕酮對該信號通路的影響，從而探討該信號通路在月經(jīng)期子宮內(nèi)膜崩解和修復(fù)過程中的作用及孕酮調(diào)控作用。
　　方法：120只未

2、交配健康成年雌性C57BL/6J小鼠去勢，經(jīng)歷雌孕激素序貫療法及在子宮角注射無菌花生油誘導(dǎo)蛻膜化49h后取出孕酮皮埋管，模擬生理性孕酮撤退，此點記為孕酮撤退0h。其中90只小鼠隨機(jī)分為9組，分別在孕酮撤退后0h、8h、12 h、16 h、20 h、24 h、32 h、40 h、48 h（48 h為小鼠生理性孕酮撤退周期）頸椎脫臼處死收集子宮角。另外30只小鼠分為三組進(jìn)行孕酮回植實驗：1216 h組（孕酮撤退后12 h回植16 h處死）、

3、1224 h組（孕酮撤退后12 h回植24 h處死）、1624 h組（孕酮撤退后16 h回植24 h處死）。通過qRT-PCR法檢測子宮內(nèi)膜組織中Akt、GSK3βmRNA表達(dá)，Western blot和免疫組織化學(xué)檢測總Akt(t-AKT)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)蛋白的表達(dá)和定位。
　　結(jié)果：⑴Akt/GSK3β信號通路相關(guān)分子在小鼠生理性孕酮撤退月經(jīng)樣改變模型子宮內(nèi)膜中的表達(dá)：孕酮撤退后

4、各組小鼠子宮內(nèi)膜組織中t-Akt蛋白表達(dá)量無明顯差異（P>0.05），而Akt mRNA和p-Akt（Ser473)蛋白表達(dá)量在孕酮撤退后逐漸降低且在20 h達(dá)到最低后又逐漸增加；GSK3βmRNA和p-GSK3β(Ser9)蛋白在孕酮撤退后表達(dá)先增加，8 h達(dá)到高峰（P<0.05）后有所下降且24 h表達(dá)量最低，然后在修復(fù)期又逐漸增加。免疫組化結(jié)果顯示，p-Akt和p-GSK3β蛋白在小鼠子宮組織中表現(xiàn)出相似的表達(dá)分布模式，主要廣泛散

5、在表達(dá)于蛻膜化區(qū)域的基質(zhì)細(xì)胞及腺上皮和腔上皮細(xì)胞中，在蛻膜化區(qū)域周邊稍有集中分布呈帶的趨勢。⑵月經(jīng)發(fā)生早期階段孕酮回植對Akt/GSK3β信號通路相關(guān)分子的影響：月經(jīng)發(fā)生早期階段的3個組（12 h組、1216 h組和16 h組）中，Akt與GSK3βmRNA表達(dá)具有顯著相關(guān)性（r=0.819,p<0.01）,1216 h組Akt與GSK3βmRNA表達(dá)量與16 h組表達(dá)量大致相等（p>0.05）,且均低于12 h組（p<0.05）；t-

6、Akt蛋白在12 h組、1216 h組和16 h組中表達(dá)均無明顯差異（p>0.05），而p-Akt、p-GSK3β蛋白表達(dá)趨勢一致（r=0.867,p<0.01），與12 h組相比，1216 h組表達(dá)量顯著增高（p<0.05），而16 h組蛋白表達(dá)量低于12 h組和1216 h組（p<0.05）。⑶月經(jīng)發(fā)生晚期階段孕酮回植對Akt/GSK3β信號通路相關(guān)分子的影響：月經(jīng)發(fā)生晚期階段的3個組（1224 h組、1624 h組和24 h組）中

7、，Akt與GSK3βmRNA表達(dá)均無明顯差異；t-Akt蛋白表達(dá)也無明顯差異（p>0.05），而1224h組中p-Akt和p-GSK3β蛋白表達(dá)較強，1624 h組和24 h組表達(dá)量較低，特別是在24 h組基本檢測不到。
　　結(jié)論：①孕酮撤退所誘導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜崩解及隨后的子宮內(nèi)膜修復(fù)可能受Akt/GSK3β信號通路的調(diào)控。②在月經(jīng)發(fā)生關(guān)鍵時期之前回植孕酮可能是通過非轉(zhuǎn)錄機(jī)制快速激活A(yù)kt/GSK3β信號通路及其下游級聯(lián)反應(yīng)，從而