Lyn激酶通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制哮喘小鼠氣道粘液高分泌的相關(guān)研究.pdf

1、目的：支氣管哮喘是越來越受大家關(guān)注的慢性炎癥性疾病，嚴(yán)重影響著人民的生活質(zhì)量。粘液高分泌是支氣管哮喘重要的病理特征，也是其難于控制的一個(gè)重要的原因，而其發(fā)病機(jī)制仍舊不明確，目前有很多實(shí)驗(yàn)研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與Lyn激酶在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，故本實(shí)驗(yàn)旨在研究Lyn激酶對支氣管哮喘中粘液高分泌的調(diào)節(jié)是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。
　　方法:將15只8-10周齡的C57雌性野生型小鼠隨機(jī)分為正常對照組（NS組）、模型組（OVA組）、4

2、-PBA陽性對照組（OVA+4-PBA組）；將10只Lyn+/+轉(zhuǎn)基因C57雌性小鼠隨機(jī)分為對照組（Lyn-TG NS組）、模型組（Lyn-TG OVA組）；OVA組、Lyn-TG OVA組、OVA+4-PBA組在第1、14天使用0.2ml含卵清白蛋白（OVA）的致敏液腹腔注射致敏、在第3-8周激發(fā)，每只已致敏的小鼠用1％戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔麻醉后，將50微升含OVA10ug的激發(fā)液經(jīng)鼻滴入，每周兩次。OVA+4-PBA組每只小

3、鼠在滴鼻激發(fā)前2小時(shí)使用4-PBA（1g/kg，溶于 PBS）灌胃處理小鼠，NS組、Lyn-TG NS組使用等量的生理鹽水（NS）致敏、激發(fā)，最后一次激發(fā)24h后處死小鼠并收集肺泡灌洗液和肺組織；肺泡灌洗液（BALF）行細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞分類、ELISA測定IL-13，肺組織行HE染色（Hematoxylin-eosin staining）,PAS染色（Periodic Acid-Schiff,PAS），免疫組化檢測IL-13，肺組織冰凍切

4、片免疫熒光檢測 BIP、CHOP、MUC5AC的表達(dá)，蛋白印跡法（Western blot）檢測BIP、CHOP、Lyn、PI3K/AKT等相關(guān)蛋白表達(dá),PCR檢測MUC5AC基因表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組的肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞比例升高，而與OVA組比較，OVA引發(fā)的過敏性氣道炎癥特點(diǎn)在Lyn高表達(dá)轉(zhuǎn)基因小

5、鼠和使用了4-PBA處理的小鼠中受到了抑制，表現(xiàn)為白細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的比例減少；
　?。?）與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組的小鼠肺泡灌洗液和肺組織中IL-13升高，在暴露于OVA的小鼠，Lyn激酶和4-PBA可以抑制IL-13的升高；
　?。?）與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組的小鼠肺組

6、織炎性細(xì)胞浸潤和炎癥評(píng)分明顯增加，與OVA組比較，而OVA引發(fā)的過敏性氣道炎癥特點(diǎn)在Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組受到了抑制，表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤和炎癥評(píng)分均降低；
　　（4）與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組杯狀細(xì)胞增生和氣道粘液分泌明顯增多；與OVA組比較，Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組杯狀細(xì)胞增生和氣道粘液分泌受到了明顯的抑制；
　　（5

7、）肺組織免疫熒光：與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組BIP、CHOP、MUC5AC蛋白表達(dá)明顯增多，Lyn-TG OVA組、OVA+4-PBA組肺組織BIP、CHOP、MUC5AC蛋白表達(dá)比OVA組減少；
　?。?）Western blot檢測：與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組BIP、CHOP、PI3K/AKT、NFκ

8、B表達(dá)升高，Lyn-TG OVA組、OVA+4-PBA組肺組織BIP、CHOP、PI3K/AKT、NFκB的表達(dá)較OVA組減少；Lyn-TG所有小鼠Lyn蛋白表達(dá)較比普通野生型小鼠升高。
　?。?）PCR檢測：與NS組和Lyn-TG NS組比較，OVA組、Lyn-TG OVA組和OVA+4-PBA組MUC5AC基因表達(dá)升高，Lyn-TG OVA組、OVA+4-PBA組肺組織MUC5AC基因表達(dá)較OVA組減少。結(jié)論：
　　1、