IRF1與IFN-β協(xié)同調(diào)節(jié)M1巨噬細(xì)胞極化及其抗腫瘤效應(yīng).pdf

1、目的：初步探討IRF1與IFN-β協(xié)同調(diào)節(jié)M1巨噬細(xì)胞極化的機(jī)制及其抗腫瘤效應(yīng)。
　　方法：用PMA，IFN-γ及LPS將U937單核系腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)成經(jīng)典極化的巨噬細(xì)胞（M1），流式細(xì)胞術(shù)檢測M1/M2表面標(biāo)志物CD86及CD206，熒光定量PCR及ELISA分別檢測M1/M2相關(guān)細(xì)胞因子：IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α及IL-10。用中和性單抗及siRNA-IFNB1

2、/siIRF1兩種方法將IFN-β中和，或IFNB1或IRF1干擾后，檢測內(nèi)源性IFN-β以及IRF1對M1巨噬細(xì)胞極化的影響，同時(shí)熒光定量PCR，Western blot及ELISA檢測IRF1、IFN-β和 IRF5的表達(dá)情況。以條件培養(yǎng)基（ CM）分別培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系SMCC-7721和 HepG2，用 CCK8檢測肝癌細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測肝癌細(xì)胞侵襲。
　　結(jié)果：用U937構(gòu)建的M1巨

3、噬細(xì)胞模型高表達(dá)M1相關(guān)標(biāo)志物IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α和CD86（P＜0.05），低表達(dá)M2表面標(biāo)志物CD206。阻斷IRF1或IFN-β的作用后，與對照組相比，M1相關(guān)標(biāo)志物IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α和CD86表達(dá)降低（P＜0.05），M2表面標(biāo)志物CD206和IL-10表達(dá)升高（P＜0.05）；阻斷I

4、RF1后，IFN-β和IRF5表達(dá)降低；阻斷IFN-β后，IRF1和IRF5表達(dá)降低。用阻斷IRF1和IFN-β后的條件培養(yǎng)基（CM-siIFNB1或CM-Ab）培養(yǎng)SMCC-7721和HepG2后，與對照組相比，肝癌細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：在用IFN-γ及LPS誘導(dǎo)而成的U937-M1巨噬細(xì)胞模型中，IRF1和IFN-β相互調(diào)節(jié)，且二者可能共同調(diào)節(jié)IRF5的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)M1巨噬