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文檔簡介
1、神經(jīng)病理性疼痛與脊髓背角等中樞鎮(zhèn)痛有效區(qū)域小膠質(zhì)細胞的活化密切相關。活化的小膠質(zhì)細胞根據(jù)功能表型分為以促炎功能為主的M1型和以抗炎功能為主的M2型小膠質(zhì)細胞,M1型小膠質(zhì)細胞高表達多種M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6。本課題前期工作表明,鉤吻素子具有顯著的抗神經(jīng)病理性疼痛作用,其作用與其抑制脊髓背角小膠質(zhì)細胞的活化有關,但鉤吻素子抑制小膠質(zhì)細胞活化的細胞分子機制有待于探索。鑒此,本文分別在高糖和LPS誘
2、導的BV-2細胞模型上,分析鉤吻素子對BV-2小膠質(zhì)細胞M1極化的作用及其與上游調(diào)控因子IRF8、NF-κB/p65表達的關系,為闡明鉤吻素子抗NP等藥理作用的細胞分子機制奠定基礎。
目的:在高糖和LPS誘導的BV-2細胞M1極化模型上,觀察鉤吻素子對M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6以及IRF8等蛋白水平和mRNA水平的影響,明確鉤吻素子對小膠質(zhì)細胞M1極化的抑制作用,并探討其作用與其調(diào)節(jié)IR
3、F8等表達的關系。
方法:⑴高糖誘導BV-2小膠質(zhì)細胞M1極化,采用Western blot和QPCR方法觀察鉤吻素子對高糖誘導的BV-2細胞M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6表達的影響;⑵LPS誘導BV-2細胞M1極化,選用Western blot和QPCR方法觀察鉤吻素子對LPS誘導的BV-2細胞M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6表達的影響;⑶采用Wester
4、n blot和QPCR方法,分別觀察鉤吻素子對高糖、LPS刺激BV-2細胞IRF8和NF-κB/p65表達的影響。
結果:①建模和給藥條件的選擇:與對照組細胞存活率相比,50mM高糖或1.0μg/ml LPS作用24 h不影響細胞存活率;鉤吻素子對BV-2細胞作用24 h和48 h的IC50值分別為1.203 mM和0.5968 mM,高糖50 mM或LPS1μg/ml與鉤吻素子200μM共同作用24h對細胞活力無顯著影響,高
5、糖能夠誘導BV-2細胞M1極化標志物mRNA水平升高,作用呈濃度和時間依賴關系。②鉤吻素子對高糖誘導BV-2細胞M1極化的作用:高糖模型組細胞M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平和 mRNA水平顯著高于對照組;鉤吻素子可顯著降低模型細胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平;鉤吻素子可顯著降低模型細胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和 IL-1β mRNA水平,作用呈濃
6、度依賴關系。③鉤吻素子對LPS誘導BV-2細胞M1極化的作用:LPS模型組細胞M1極化標志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平和mRNA水平顯著高于對照組;鉤吻素子可顯著降低模型細胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平,作用呈濃度依賴關系;鉤吻素子可顯著降低模型細胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平,作用呈濃度依賴關系。④鉤吻素子對高糖誘導BV-2細胞IRF
7、8、NF-κB/p65表達的影響:高糖模型組細胞 IRF8蛋白水平和 mRNA水平均顯著升高;鉤吻素子可顯著降低模型細胞 IRF8蛋白水平和 mRNA水平。鉤吻素子對高糖引起 NF-κB/p65蛋白水平的升高未有顯著抑制作用。5.鉤吻素子對LPS誘導 BV-2細胞 IRF8、NF-κB/p65表達的影響:LPS模型組細胞IRF8蛋白水平和mRNA水平均顯著升高;鉤吻素子可顯著降低模型細胞IRF8蛋白水平和mRNA水平。鉤吻素子對LPS引
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