苦丁茶中異綠原酸的提取純化工藝及其抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)研究.pdf

1、苦丁茶是我國(guó)民間傳統(tǒng)的藥食兩用植物，異綠原酸是其主要活性成分之一，研究表明苦丁茶中異綠原酸類化合物具有良好的抗炎功效，但對(duì)其抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究較少，本課題將對(duì)苦丁茶中異綠原酸的提取純化工藝及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用進(jìn)行研究。
　　為測(cè)定苦丁茶中異綠原酸的含量，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為：流速1.0 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為325 nm。結(jié)果表明：苦丁茶中三種異綠原酸的進(jìn)樣量在0.02μg～2.

2、00μg范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性和加樣回收率結(jié)果良好，符合定量分析的要求。本試驗(yàn)所建立的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，為苦丁茶中異綠原酸的進(jìn)一步研究應(yīng)用提供了依據(jù)。
　　為充分提取苦丁茶中的異綠原酸成分，選用水提取的方法，并運(yùn)用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)苦丁茶中異綠原酸水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，以總異綠原酸含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定含量。結(jié)果表明，第1次補(bǔ)足1.83倍吸水量后加10倍量水，浸泡2 h

3、，其余每次加10倍量水，共提取3次，每次煎煮1 h,為苦丁茶中異綠原酸的最佳水提工藝。
　　為純化、富集苦丁茶中的異綠原酸成分，優(yōu)化苦丁茶中異綠原酸純化、富集工藝參數(shù)，運(yùn)用柱層析的方法，通過(guò)靜態(tài)吸附和解吸附試驗(yàn)篩選出最佳樹脂為MCI-GEL HP50SS，并通過(guò)吸附和解吸附試驗(yàn)對(duì)純化工藝參數(shù)進(jìn)行了考察，結(jié)果為：采用濕法上樣，上樣柱溫30℃，上樣流速為3 BV/h，上樣液濃度為4.32 mg/mL，上樣液量為10 mL，洗脫流速為3

4、 BV/h，先用5 BV水洗脫除雜，再用30％乙醇溶液洗脫10 BV，可較好地純化富集苦丁茶中異綠原酸，經(jīng)樹脂純化后的干燥品中總異綠原酸的純度為82.30％，純化倍數(shù)為9.53，總異綠原酸的純化保留率為73.40%。
　　為研究苦丁茶中異綠原酸抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用，采用足趾注入完全弗氏佐劑的方法制備小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型，尾靜脈注射給予高、中、低劑量異綠原酸溶液和陽(yáng)性對(duì)照藥醋酸地塞米松溶液，通過(guò)比較各組小鼠的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)

5、苦丁茶中異綠原酸抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用。結(jié)果如下：
　　小鼠足趾腫脹抑制率結(jié)果顯示，正常對(duì)照組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥狀，其他各組則有不同程度的關(guān)節(jié)腫脹癥狀表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，陽(yáng)性對(duì)照組和異綠原酸中、高劑量組均對(duì)小鼠足腫脹有明顯的抑制作用，與模型組對(duì)比具有極顯著差異(P<0.01)，其對(duì)小鼠足腫脹抑制率依次為：77.33%、57.11%、79.51%；苦丁茶中異綠原酸低劑量組對(duì)小鼠足腫脹有抑制作用，與模型組對(duì)比具有顯著性差

6、異(P<0.05)，其對(duì)小鼠足腫脹抑制率為9.85%。
　　組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，正常對(duì)照組小鼠組織切片骨結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)任何組織腫脹和病變。與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠皮下組織彌漫性炎癥，伴大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，異綠原酸各給藥劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均能不同程度減輕佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠炎癥癥狀，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。異綠原酸高劑量組的療效相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照組更為顯著，徹底遏制了佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足部組織病理改變，這一結(jié)果表明，異綠原酸對(duì)佐

7、劑誘導(dǎo)的AA具有確切的治療作用，能有效抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，從而減輕炎癥反應(yīng)，對(duì)關(guān)節(jié)組織的破壞、損傷產(chǎn)生積極的改善和保護(hù)作用。
　　血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照組和異綠原酸中、高劑量組小鼠血清中NO水平均顯著降低，與模型組相比差異顯著(P<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組和異綠原酸中、高劑量組小鼠血清中PGE2水平均顯著降低，與模型組比較差異顯著(P<0.05)。
　　本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)苦丁茶中異綠原酸的提取純化工藝研究，得到了純度較高的