Taxol和Y27632聯合應用促進脊髓損傷后新生SD大鼠背根神經節(jié)神經元軸突生長的體外實驗研究.pdf

1、目的：研究模擬在脊髓損傷的微環(huán)境中，Taxol與Y27632聯合應用對新生SD（Sprague Dawley，SD）大鼠背根神經節(jié)神經元的軸突生長的影響。
　　方法：①21只SD大鼠隨機分為對照組7只，手術組7只（用改良Allen法制作雌性成年SD大鼠T9平面完全性截癱模型），假手術對照組7只。制模后7天后取出T8～T10段脊髓，并經過分離、過濾形成組織勻液制備脊髓萃取液。②分離、培養(yǎng)以及鑒定新生SD大鼠的背根神經節(jié)神經元(dor

2、sal root ganglion neurons,DRGNs）。③分組培養(yǎng)、觀察脊髓萃取液對DRG神經元軸突生長，分別為：A組DRGNs+50μlPBS，B組DRGNs+50μl假手術組脊髓萃取液，C組DRGNs+50μl損傷脊髓萃取液，D組DRGNs+50μl對照組脊髓萃取液。培養(yǎng)2d后，各組于倒置顯微鏡下測量軸突生長的平均長度，然后運用免疫熒光染色技術，測量軸突遠端微管熒光平均密度。實驗2：DRGNs、脊髓萃取液分別和共同與Y27

3、632，Taxol培養(yǎng)、DRG神經元軸突生長。共分為五組， A組為DRGNs+50μlPBS，B組為DRGNs+50μl脊髓萃取液（假手術組）；C組為DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+3 nM Taxol，D組為DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+30μM Y27632；E組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+3nM Taxol+30μMY27632。培養(yǎng)1d，2d后于倒置顯微鏡下測量軸突生長的平均長度

4、，然后運用免疫熒光染色技術，測量軸突遠端微管熒光平均密度。
　　結果：①實驗1：共同培養(yǎng)2d后，各組軸突生長平均長度：A組為142.1±5.7μm，B組為144.8±3.1μm， C組為47.2±3.5μm，D組為136.9±4.2μm。單因素方差分析示：C組和A、B、D組之間，P<0．01，有顯著的統(tǒng)計學差異；軸突遠端平均微管熒光密度， A組為175.1±2.9 AFU/μm，B組為191.6±3.1 AFU/μm， C組為64

5、.5±1.5 AFU/μm，D組為174.8±3.1 AFU/μm。C組和A、B、D組相比較，P<0.01，有明顯的統(tǒng)計學差異。②實驗2：共同培養(yǎng)1d后，各組軸突平均長度： A組為136.5±4.6μm， B組為47.6±3.9μm， C組為137.9±5.2μm， D組為158.6±4.6μm， E組為181.2±5.2μm，單因素方差分析示：B組和A、C、D及E組相對比，P<0.01，有顯明的統(tǒng)計學上的差異。2 d后，軸突平均長度，

6、A組為142.9±1.4μm，B組為44.5±2.2μm，C組為152.6±5.3μm，D組為168.1±3.1μm，E組為194.6±3.2μm。單因素方差分析示：B組與A、C、D及E之間，P<0.01，有明顯的統(tǒng)計學差異。C組和D、E組相比較，P<0．05，有明顯的統(tǒng)計學差異。E組和 A、B、C、D組相比較，P<0.01，有明顯的統(tǒng)計學差異；A組與C組之間，P>0．05，兩者無統(tǒng)計學差異。軸突遠端平均微管熒光密度， A組為181.8

7、±3.4 AFU/μm， B組為61.6±2.7 AFU/μm， C組為205.2±2.1 AFU/μm， D組為401.2±3.5 AFU/μm，E組為470.2±3.6 AFU/μm。B組和A、C、D、E組相比較，P<0．01，有明顯的統(tǒng)計學差異。E組和A、B、C、D組相比較，P<0．01，有明顯的統(tǒng)計學差異；C組與E組之間，P>0．05，兩者無統(tǒng)計學差異。
　　結論：① DRGNs置于完全性截癱大鼠脊髓萃取液中培養(yǎng)，其軸突的