脊髓背根神經(jīng)節(jié)前體細(xì)胞在促進(jìn)脊髓損傷功能恢復(fù)中作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)和交通運(yùn)輸業(yè)的飛速發(fā)展，創(chuàng)傷性脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）的發(fā)病率逐年上升，急性SCI后神經(jīng)功能的預(yù)后十分不理想，常常導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)、感覺完全或部分喪失以及自主神經(jīng)功能障礙，整個(gè)社會(huì)家庭和個(gè)人帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和心理負(fù)擔(dān)。臨床中對(duì)于脊髓損傷的治療主要有手術(shù)治療、藥物治療，包括類固醇激素、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物、脫水藥，以及其他物理治療等，但上述治療手段未達(dá)到滿意的治療效果。因此，對(duì)脊髓損傷后如何促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和

2、再生的研究成為廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)問題。
　　細(xì)胞治療是脊髓損傷神經(jīng)修復(fù)提供一種具有廣闊前景治療手段。然而，尋找合適的細(xì)胞來源一直以來是細(xì)胞治療領(lǐng)域研究的焦點(diǎn)。脊髓背根神經(jīng)節(jié)中的前體細(xì)胞是目前研究較少的一類細(xì)胞，前人研究提示這類細(xì)胞可能具有自我增殖和多向分化的潛能。然而對(duì)于其在脊髓損傷修復(fù)過程中的作用目前尚未見明確報(bào)道。
　　目的：體外實(shí)驗(yàn)中明確脊髓背根神經(jīng)元前體細(xì)胞體外增殖特性及定向分化特征，建立大鼠脊髓損傷半切模型，為體內(nèi)觀察

3、脊髓背根神經(jīng)元前體細(xì)胞提供動(dòng)物模型支持，繼而評(píng)估脊髓背根神經(jīng)元前體細(xì)胞在體增殖及分化情況，初步探究其對(duì)脊髓損傷后功能恢復(fù)的影響。
　　材料與方法：將出生1天的大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)取材后，通過雙酶消化法獲得單細(xì)胞懸液，在干細(xì)胞培養(yǎng)液的作用下，通過CCK-8試劑盒檢測(cè)前體細(xì)胞吸光光度值來確定前體細(xì)胞的增殖特性。通過加入誘導(dǎo)分化試劑后檢測(cè)前體細(xì)胞的分化方向，用免疫熒光的方法來研究該類細(xì)胞向神經(jīng)系統(tǒng)各類細(xì)胞分化的比例。以重組腺相關(guān)病毒作為載

4、體將前體細(xì)胞標(biāo)記上綠色熒光蛋白后移植到脊髓半切損傷模型大鼠的損傷部位作為實(shí)驗(yàn)組，注射生理鹽水作為對(duì)照組，細(xì)胞移植后1，4，6周通過BBB-21評(píng)分法來確定前體細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，通過免疫熒光的方法研究前體細(xì)胞在脊髓中的遷移和分化。數(shù)據(jù)采用單因素方差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
　　結(jié)果：在體外通過雙酶消化法得到的單細(xì)胞懸液，經(jīng)過控制純化的條件得到高純度的背根神經(jīng)前體細(xì)胞。在干細(xì)胞培養(yǎng)液的

5、作用下，前體細(xì)胞呈現(xiàn)干細(xì)胞特有的克隆團(tuán)樣增殖，通過CCK-8試劑盒檢測(cè)前體細(xì)胞吸光光度值，證實(shí)前體細(xì)胞具有自我增殖的能力。通過加入誘導(dǎo)分化試劑刺激前體細(xì)胞進(jìn)行分化，證實(shí)前體細(xì)胞主要向膠質(zhì)細(xì)胞方向進(jìn)行分化，僅有少部分細(xì)胞分化為神經(jīng)元。在注入脊髓損傷模型后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組通過不同時(shí)間點(diǎn)BBB-21評(píng)分證實(shí)前體細(xì)胞移植組BBB-21評(píng)分明顯高于生理鹽水注射組，通過單因素方差分析再次證實(shí)兩組之間具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。免疫熒光檢測(cè)