BMP4對SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元存活以及軸突生長的影響.pdf

1、目的:研究BMP4對新生SD大鼠的耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元存活以及軸突生長的影響
　　方法:1.分離新生SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié),制成單細胞懸液,首先用含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液促使其貼壁,然后用無血清的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng),在培養(yǎng)液中加入不同濃度的BMP4或者Noggin,培養(yǎng)3天后,通過免疫組織化學熒光染色,計數(shù)神經(jīng)元總數(shù),單極神經(jīng)元和雙極神經(jīng)元的數(shù)目,并測量神經(jīng)元的長度,然后神經(jīng)元數(shù)目用spss10.0軟件做On

2、e-way ANOVAs統(tǒng)計學分析,長度數(shù)據(jù)用kruskal-wallis非參數(shù)檢驗方法分析差異。所有P值≤0.05的對比被認為是具有顯著的統(tǒng)計學差異。2.分離新生SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié),剪成均勻的幾段,首先用含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液促使其貼壁,然后用無血清的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng),在培養(yǎng)液中加入不同濃度的BMP4或者Noggin,培養(yǎng)42小時后,通過免疫組織化學熒光染色,計數(shù)神經(jīng)元總數(shù),并測量神經(jīng)元的長度,然后神經(jīng)元

3、數(shù)目用spss10.0軟件做One-way ANOVAs統(tǒng)計學分析,長度數(shù)據(jù)用kruskal-wallis非參數(shù)檢驗方法分析差異。所有P值≤0.05的對比被認為是具有顯著的統(tǒng)計學差異。
　　結果:為了研究BMP4對成熟的耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元存活以及軸突生長的影響,新生的SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元酶解消化后,單細胞貼壁培養(yǎng)三天后。在對照組中,神經(jīng)元存活總數(shù)目為79.67±15.23個,單極神經(jīng)元的數(shù)目為26.33±6.29個,雙極

4、神經(jīng)元的數(shù)目為21.83±3.75個;3ng/ml BMP4組神經(jīng)元存活總數(shù)目為130.33±30.83個,單極神經(jīng)元的數(shù)目為59.67±16.19個,雙極神經(jīng)元的數(shù)目為47.33±13.30個;Noggin阻斷組中,神經(jīng)元存活總數(shù)目為44.33±8.19個,單極神經(jīng)元的數(shù)目為16.33±4.26個,雙極神經(jīng)元的數(shù)目為個10±1.53個。BMP4組相對于對照組神經(jīng)元總數(shù)目顯著增多,神經(jīng)元總數(shù)目增加63.6％,其中單極神經(jīng)元和雙極神經(jīng)元數(shù)

5、目分別增加127％和117％。而Noggin阻斷BMP4的作用后,神經(jīng)元存活的總數(shù)目顯著減少;相對于BMP4組,Noggin神經(jīng)元總數(shù)目減少66％,其中單極神經(jīng)元減少72.6％,雙極神經(jīng)元數(shù)目減少78.9％。BMP4組與對照組,BMP4與Noggin阻斷組之間神經(jīng)元存活總數(shù),單極神經(jīng)元存活數(shù)目和雙極神經(jīng)元存活數(shù)目的差異均具有極其顯著的統(tǒng)計學意義。
　　對于神經(jīng)元的軸突長度,在對照組中,單極神經(jīng)元的平均軸突長度為217.22±18.

6、43μm,雙極神經(jīng)元的長軸突和短軸突的平均長度分別是227.71±18.54μm和89.75±9.61μm;在3ng/m1 BMP4濃度組,單極神經(jīng)元的平均軸突長度為285.53±13.10μm,雙極神經(jīng)元的長軸突和短軸突的平均長度分別是255.64±19.30μm和106.87±9.36μm;Noggin組中,單極神經(jīng)元的平均軸突長度為197.55±16.91μm,雙極神經(jīng)元的長軸突和短軸突的平均長度分別是227.69±37.42μm

7、和110.04±17.74μm。BMP4組相對于對照組,神經(jīng)元軸突增長,其中單極神經(jīng)元的軸突顯著地增長。Noggin阻斷BMP4的作用后,神經(jīng)元的軸突變短,其中單極神經(jīng)元的軸突顯著地變短。對于單極神經(jīng)元,BMP4濃度組與對照組,Noggin阻斷組之間神經(jīng)元軸突的平均長度均有顯著的差異;對于雙極神經(jīng)元,除1ng/ml BMP4外,BMP4濃度組與對照組,Noggin組之間神經(jīng)元長軸突和短軸突的平均長度均無顯著差別。為了進一步研究BMP4對

8、成熟的耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元存活以及軸突生長的影響,新生的SD大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)組織塊貼壁培養(yǎng)42小時后,每個組織塊上軸突的數(shù)目相當于神經(jīng)元數(shù)目。在對照組中,每個組織塊中神經(jīng)元數(shù)目為6.4±1.75個;20ng/mlBMP4組中,每個組織塊中神經(jīng)元數(shù)目為7±1.17個;40ng/mlBMP4組中,每個組織塊中神經(jīng)元數(shù)目為13.06±1.26個;Noggin阻斷BMP4的作用后,神經(jīng)元數(shù)目顯著減少,每個組織塊中神經(jīng)元數(shù)目為6.2±1.02個

9、。相對于對照組和Noggin組,低濃度BMP4組神經(jīng)元數(shù)目沒有變化,而高濃度BMP4組神經(jīng)元數(shù)目顯著增多。20ng/ml BMP4組,對照組和Noggin組之間神經(jīng)元數(shù)目無顯著差異;40ng/ml BMP4組與對照組,Noggin組之間神經(jīng)元數(shù)目的差異具有顯著的統(tǒng)計學意義;對于神經(jīng)元軸突的長度,在對照組中,神經(jīng)元軸突平均長度為124.59±6.65μm;20ng/mlBMP4組中,神經(jīng)元軸突平均長度為116.25±5.03μm;40ng

10、/mlBMP4組中,神經(jīng)元軸突的平均長度為140.62±3.09μm;Noggin阻斷BMP4的作用后,神經(jīng)元的軸突平均長度為119.52±4.79μm。相對于對照組和Noggin組,高濃度BMP4組的軸突顯著增長,而低濃度BMP4組無變化。20ng/mlBMP4組,對照組和Noggin組之間的軸突長度無顯著差異;40ng/ml BMP4組與對照組,以及40ng/ml BMP4組與Noggin組之間軸突長度的差異都具有顯著的統(tǒng)計學意義。