重金屬汞單克隆抗體制備與免疫檢測(cè)方法建立.pdf

1、重金屬是有毒和對(duì)環(huán)境有持久污染的物質(zhì)，它并不像碳源污染物那樣能完全降解為無毒的物質(zhì)，而僅僅是通過一些有限的生物的或化學(xué)過程進(jìn)行轉(zhuǎn)化。這些轉(zhuǎn)化對(duì)一些特定的金屬只是限制其毒性或可溶性，一些金屬通常競(jìng)爭(zhēng)過程重新循環(huán)，最終又恢復(fù)到原來的毒性狀態(tài)。在環(huán)境中金屬離子長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合在土壤中或沉淀物中，這些結(jié)合的金屬除了對(duì)下層生長(zhǎng)的動(dòng)物的外都相對(duì)無毒。但天氣的變化、土壤或水中PH值或環(huán)境的結(jié)合都能夠使金屬發(fā)生移動(dòng)，從而大大提高了它們的可利用性和高效的毒性。

2、汞是毒性最強(qiáng)的重金屬元素之一，目前汞的檢測(cè)方法仍然依賴傳統(tǒng)儀器，但免疫檢測(cè)方法具有檢測(cè)快速、費(fèi)用低、易于操作、易懂、簡(jiǎn)單易攜、而且高靈敏性和可選擇性等特點(diǎn)，近年來日益受到國(guó)內(nèi)外廣泛的關(guān)注。 本研究以匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)與汞離子通過雙功能螯合劑異硫氰基-苯甲基-乙二胺四乙酸(ITCBE)偶聯(lián)，獲得完全抗原KLH-ITCBE-Hg(Ⅱ)，以該抗原免疫BALB/C小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，經(jīng)ELISA法篩選及有限稀釋法亞克隆化，獲得了

3、5株可穩(wěn)定分泌抗重金屬汞的雜交瘤細(xì)胞株(E/H9、E/B<,2>、1/F<,11>、1/H<,7>和B/B<,7>)。所分泌的抗體均為IgM、к型，其中雜交瘤細(xì)胞株E/H<,9>、1/F<,11>和B/B<,11>細(xì)胞培養(yǎng)上清液效價(jià)分別達(dá)1：640、1：320、1：160，腹水效價(jià)分別達(dá)1：6400、1：3200、1：6400。B/B<,11>的親和常數(shù)為2.981×10<'8>L/mol，特異性試驗(yàn)表明：B/B<,11>與其它金屬離子

4、均無明顯交叉反應(yīng)，具有較高的特異性。本研究成功制備的高親合力和高特異性的抗汞單克隆抗體，為建立農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中重金屬汞的快速免疫檢測(cè)技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。 選取一株雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞B/B<,11>所分泌的抗體進(jìn)行研究。通過對(duì)鹽離子強(qiáng)度等四個(gè)影響因子的研究建立了ELISA檢測(cè)體系，其檢測(cè)條件為：包被抗原BSA-GSH-Hg(Ⅱ)濃度0.9μg/mL，細(xì)胞培養(yǎng)上清液2倍稀釋，1％明膠作為封閉物，反應(yīng)基質(zhì)HBS中離子強(qiáng)度為0.15mol/L，

5、pH值為5.5；以Logit(B/B<,0>)作縱坐標(biāo)與Hg<'2+>濃度(mM)的負(fù)對(duì)數(shù)值作橫坐標(biāo)建立檢測(cè)曲線，在0.00001-0.01mmol/L范圍內(nèi)呈顯著線性關(guān)系，檢測(cè)方程為Y=1.6723X-4.6806，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.994，檢測(cè)極限值為9.105×10<'-6>mmol/L。批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為1.2％和4.7％，超純水、自來水、池塘水樣和小青菜樣品中的添加回收率分別為102.21％、96.92％、103.23％和8