抗重金屬鎘單克隆抗體的制備及免疫層析檢測方法的研究.pdf

1、鎘是一種毒性很強的重金屬元素。鎘對腎臟、骨骼、免疫系統(tǒng)等有毒害作用，因此對于鎘的檢測受到了普遍關(guān)注。研究環(huán)境中鎘離子的快速檢測方法，對于人體健康、改善環(huán)境具有重要的現(xiàn)實意義。鎘離子的傳統(tǒng)檢測方法由于存在樣品處理復(fù)雜、儀器設(shè)備費用昂貴、測定操作繁瑣等原因，限制了這些方法在實際樣品檢測中的應(yīng)用。而近年來發(fā)展起來的免疫學(xué)檢測技術(shù)由于能夠彌補以上不足，得到了迅速的發(fā)展。試紙條檢測法由于前處理簡單、攜帶方便、結(jié)果易于判斷等優(yōu)點成為了免疫學(xué)檢測方法

2、的首選。我們用Cd2+-EDTA-BSA免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用細胞融合技術(shù)篩選出1A3、2B7、2E10、4F3共4株敏感特異的雜交瘤細胞，其分泌Cd2+-EDTA mAb的間接ELISA效價細胞培養(yǎng)上清分別為0.512×102、0.512×102、1.024×102、0.256×102，腹水分別為2.56×105、1.28×105、5.12×105、2.56×105，親和常數(shù)（ Ka）分別為1.01×108、1.29×107、7.

3、58×108、1.87×108（L/mol），其中親和力最高的2E10株阻斷 ELISA測定其IC50為1.56μg/L，與 Hg2+-EDTA的 CR％為96.75%，與其它金屬鰲合物無 CR。我們利用2E10來制備膠體金免疫層析試紙條。制備時我們研究出最適宜的金顆粒大小為25nm。研究并確定了金標記 CdmAb的適宜標記濃度為30μg/mL。最后應(yīng)用 CdmAb成功研制出 Cd殘留快速檢測免疫金標試紙，該試紙的目測檢測限為32ng/