重金屬汞螯合物單克隆抗體制備及其ELISA檢測初步研究.pdf

1、汞是全球性污染的高毒性元素之一，在環(huán)境和生物體中可以長期積累并不可降解。無機汞可以造成人類精神障礙等疾病，烷基化的汞也具有特殊的神經(jīng)毒性，甲基汞對成人大腦具有極大的傷害，汞還可以通過影響激素代謝從而導致高血壓。目前，汞的檢測方法主要還是依靠傳統(tǒng)的檢測儀器，包括冷原子吸收光譜分析法（CV-AAS）與電感耦合等離子發(fā)射光譜分析（ICP-AES）等，這些方法具有費用高、處理量有限、檢測時間長等缺陷，而免疫檢測的方法檢測快速、費用低廉、靈敏度高

2、和選擇性強等優(yōu)點，近年來受到國內(nèi)外廣泛的關注。
　　 分別制備免疫原Hg-ITCBE-KLH與包被抗原Hg-ITCBE-BSA及ITCBE-BSA，經(jīng)過超濾純化后，三硝基苯磺酸法（TNBS）測三種抗原中ε-NH2被半抗原替換的程度依次為34．75±4．60％、40．61±0．99％、61．27±0．69％，冷原子吸收光譜分析法檢測抗原中汞離子的含量依次為38．4±0．5μg/mL、125．5±0．9μg/mL、0μg/mL，各種

3、抗原與載體蛋白的紫外吸收光譜的特征均不相同，SDS-PAGE結果顯示免疫原與包被抗原的分子量均高于各自的載體蛋白。
　　 以Hg-ITCBE-KLH免疫BALB/C小鼠，采用間接ELISA檢測效價，三次免疫后，取免疫后小鼠的脾細胞與Sp2/0骨髓瘤細胞融合制備雜交瘤，用Hg-ITCBE-BSA與ITCBE-BSA做包被抗原，篩選融合后能正常生長的細胞株，利用有限稀釋法進行2次陽性克隆。獲得一株穩(wěn)定分泌抗汞螯合物雜交瘤細胞株3C9

4、G12。其腹水效價達到5×10-3，親和常數(shù)5．63×109L/moL，單抗亞類為IgM、K型，分子量約為900kDa。特異性實驗表明，與其他金屬離子（pb2+，Cd2+，Cu2+，F(xiàn)e2+，Ca2+，Mn2+，Zn2+，Mg2+，K+，Na+）均無明顯較差反應，具有較高的特異性。本研究成功制備了高親和力和高特異性的單克隆抗體，為環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品中殘留汞的快速免疫檢測奠定了基礎。
　　 利用mAb3C9G12與Hg-ITCBE-BS