重金屬鎘離子抗原合成與單克隆抗體的制備.pdf

1、隨著人們生活水平的不斷提高和環(huán)保意識的增強(qiáng)，對重金屬污染尤為關(guān)注，殘留檢測急需加強(qiáng)。但常用的重金屬檢測方法需依靠大型儀器，大都存在樣品處理繁瑣、費(fèi)用高、檢測時(shí)間長等缺陷。本研究利用鰲合劑螯合Cd2+、偶聯(lián)載體蛋白體外合成Ca2+免疫抗原和檢測抗原；利用紫外分光光度法、三硝基苯磺酸法、以及抗血清效價(jià)檢測對其進(jìn)行評估；利用單克隆抗體制備技術(shù)初步建立鎘離子的ELISA檢測方法；旨在為重金屬Cd2+的殘留檢測提供一種方便、準(zhǔn)確、特異、低廉、快速

2、的新技術(shù)。 結(jié)果：(1)合成抗原紫外吸收峰與載體蛋白紫外吸收峰有明顯差異，游離氨基含量在33％～40％之間。(2)100 μg/只劑量免疫小鼠后，抗血清效價(jià)明顯高于50、200μg/只劑量免疫的小鼠，抗血清效價(jià)在1:81 920以上。 (3)50％的PEG,SP2/0與小鼠脾細(xì)胞細(xì)胞比例為1:7.1時(shí)，融合率高達(dá)98.4％。(4)用BSA-IEDTA-Cd和BSA-IEDTA檢測細(xì)胞上清，篩選出了2孔陽性雜交瘤細(xì)胞1A1和4E7

3、，陽性率為0.35％；經(jīng)3次陽性率100％的克隆后只獲得了抗Cd2+的雜交瘤細(xì)胞株1A1。 (5)利用已建立的間接競爭ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，1Al細(xì)胞上清效價(jià)在1:1024以上，腹水效價(jià)高于1:256 000。 (6)腹水蛋白濃度為15.04 mg/mL，單克隆抗體為IgGl。 結(jié)論：(1)IEDTA可以用于重金屬Cd2+免疫抗原或檢測抗原合成的螯合劑。(2)KLH作為免疫抗原的載體蛋白，免疫效果優(yōu)于以BSA為載體蛋白；