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1、分類號墨§魚魚：!U D C博士學(xué)位論文編號F u n c t i o n a l i d e n t i f i c a t i o na n d a n a l y s i so fS o S n R K 2 ．1 a n d S o A C L A 一／g e n e sf r o ms u g a r c a n eP H A N T H I T H U學(xué)科專業(yè)佳物越量堂皇越佳指導(dǎo)教師揚(yáng)匭洼教援論文答辯日期2 Q !

2、魚生5 旦2 2 旦 學(xué)位授予日期2 Q ! 魚生魚旦三Q 目答辯委員會主席渣太仨麴援甘蔗S o S n R K 2 ．J 和S o A C L A ．J 基因的功能鑒定與分析摘要干旱是影響甘蔗生長、發(fā)育、產(chǎn)量和質(zhì)量的一種重要因素。A T P ．檸檬酸裂解酶( A C L ) 和非酵解型蛋白激酶( S n R K 2 ) 是植物正常生長和發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控酶。A C L 催化作用檸檬酸在細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)變成乙酰輔酶A ，S n R K 2 在響應(yīng)多

3、種非生物脅迫方面發(fā)揮著重要作用。在A B A 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中，這兩個(gè)基因參與植物非生物脅迫下的發(fā)育。我們研究了S o A C L A ．j 與S D S 扎R 娩．J 在原核生物和真核生物中的調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：1 ．根據(jù)S o S n R K 2 ．J 和S o A C L A ．J 基因序列，我們克隆了這兩個(gè)基因。使用特異性的引物擴(kuò)增S o S n R K 2 ．J 和S o A C L A ．J 基因的全長并且根據(jù)原核表達(dá)

4、載體p E T 3 0 a ( + ) 和植物表達(dá)載體p R l l 0 1 一O N ，p R l l 0 1 一A N 和p U B T C 設(shè)計(jì)限制性酶切位點(diǎn)的?；谛蛄蟹治霰砻鱏 o A C L A ．J 7 和S o S n R K 2 ．j 基因的完整開放閱讀框長度分別為1 2 7 2b p 和1 0 0 2b p 。氨基酸序列分析表明，S o A C L A —J 7 和S o S n R K 2 ．J 與玉米和栽培稻中的

5、同源基因有很高的同源性。2 ．S o S n R K 2 ．1 和S o A C L A ．1 均在原核生物獲得表達(dá)。將沒有內(nèi)含子的S o S n R K 2 ．j 和S o A C L A —j 基因插入到p E T 3 0 a ( + ) 載體，其中該載體包含T 7 啟動子進(jìn)行原核表達(dá)。原核表達(dá)結(jié)果顯示重組的p E T - S o A C L A ．1 和S o S n R K 2 ．1分別為4 6k D a 和3 8 k D a