金福菇多糖TLH-3抗衰老作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、衰老是一種普遍現(xiàn)象，而抗衰老一直是科研的熱點(diǎn)之一。衰老的自由基理論闡明，衰老過(guò)程中的退行性變化是由于機(jī)體代謝產(chǎn)生的自由基的氧化作用引起的，降低其氧化作用，就會(huì)在一定程度上減少自由基對(duì)機(jī)體的損害。因此，尋找一種通過(guò)抗氧化達(dá)到清除自由基目的的天然藥物成為抗衰老藥研究熱點(diǎn)。金福菇是一種優(yōu)質(zhì)食用菌，前景廣闊。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，金福菇多糖TLH-3組分能有效的清除氧自由基和抑制紅細(xì)胞溶血及丙二醛的產(chǎn)生，并具有較高的抗氧化活性，其清除超氧陰離子

2、的IC50為126μg/mL，與Vc在同一數(shù)量級(jí)水平(111μg/mL)。因此，金福菇多糖TLH-3是否也具有相當(dāng)?shù)目顾ダ匣钚杂写M(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立細(xì)胞和動(dòng)物衰老模型，探究金福菇多糖TLH-3對(duì)細(xì)胞周期及衰老相關(guān)蛋白的表達(dá)等方面的影響，從細(xì)胞及動(dòng)物水平研究金福菇多糖TLH-3的抗衰老作用和機(jī)制，為人類(lèi)的延年益壽提供科學(xué)的依據(jù)，為開(kāi)發(fā)多糖類(lèi)藥物提供理論依據(jù)。
　　(1)檢測(cè)金福菇多糖TLH-3對(duì)t-BHP誘導(dǎo)的人胚肺成纖維細(xì)

3、胞（HELF）的凋亡保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)以HELF細(xì)胞為研究對(duì)象，首先用MTT法將不同濃度TLH-3對(duì)t-BHP作用下HELF細(xì)胞的生長(zhǎng)情況進(jìn)行了檢測(cè)，進(jìn)而運(yùn)用Hoechst33342/PI雙染法觀(guān)察保護(hù)作用，Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)分析TLH-3對(duì)t-BHP作用下的HELF細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果表明，與t-BHP誘導(dǎo)組相比，TLH-3處理組的細(xì)胞存活率較高，而且隨著TLH-3濃度的增大，細(xì)胞存活率升高;與正常對(duì)照組相比，

4、t-BHP誘導(dǎo)組凋亡和壞死細(xì)胞明顯增加，TLH-3干預(yù)組細(xì)胞生長(zhǎng)狀況有所改善且與劑量呈正相關(guān)，說(shuō)明TLH-3對(duì)細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。
　　(2)探討金福菇多糖TLH-3對(duì)HELF細(xì)胞衰老模型的作用。首先用t-BHP進(jìn)行過(guò)氧化誘導(dǎo)建立細(xì)胞衰老模型，同時(shí)用不同濃度多糖進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)各組細(xì)胞周期及p21蛋白表達(dá)。與模型組相比，金福菇多糖TLH-3可以緩解t-BHP引起的G1期細(xì)胞阻滯現(xiàn)象，說(shuō)明金福菇多糖TLH-3可以在一定程度上延緩過(guò)

5、氧化損傷導(dǎo)致的細(xì)胞衰老。
　　(3)研究金福菇多糖TLH對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型小鼠的作用。首先用D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠建立小鼠衰老模型，同時(shí)小鼠灌胃金福菇多糖TLH進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)其皮膚羥脯氨酸含量，血清、心臟SOD活力、MDA含量，HE染色觀(guān)察小鼠病理學(xué)變化，免疫組化法分析p21蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與模型組小鼠相比，TLH處理組小鼠的皮膚羥脯氨酸含量有所增加;免疫組化檢測(cè)分析顯示，衰老相關(guān)蛋白p21在各組小鼠的表達(dá)量差異不明顯