火麻仁油及其植物甾醇的抗衰老作用研究.pdf

1、　　目的：
　　在課題組前期對火麻仁油抗衰老作用實驗研究與理論研究基礎(chǔ)上,初步確認(rèn)火麻仁油中不飽和脂肪酸、植物甾醇等為有效活性成分。本研究以火麻仁中植物甾醇為目標(biāo)成分。首先開展從火麻仁油中提取植物甾醇的工藝研究,并建立火麻仁中總甾醇的含量測定方法；研究火麻仁甾醇的體外抗氧化性能及對亞硝酸鹽的清除作用,為探究火麻仁甾醇的藥理作用機(jī)制提供理論和實驗依據(jù)；觀察火麻仁油及火麻仁甾醇對家蠶壽命的影響,測定家蠶血淋巴和小鼠血清中抗氧化指標(biāo)

2、水平,來反映植物甾醇的抗衰老作用；通過測定家蠶和小鼠的呼吸指標(biāo),研究火麻仁油和火麻仁植物甾醇對實驗動物能量代謝方面的影響,為探討“藥物影響動物生長與干預(yù)動物能量代謝的關(guān)系”奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　火麻仁中植物甾醇的萃取及含量測定：采用溶劑萃取法從火麻仁油中萃取植物甾醇,以樣品量、皂化時間、萃取溶劑用量為考察因素用正交法優(yōu)選出火麻仁植物甾醇的最佳提取工藝,并用紫外分光光度法測定火麻仁中總植物甾醇的含量；火麻仁甾醇的

3、體外抗氧化能力：用分光光度法測定了火麻仁甾醇對亞硝酸鹽(NaNO2)和DPPH*的清除率,以維生素C為陽性對照,評價其抗氧化能力；火麻仁油和植物甾醇對家蠶以及小鼠抗氧化指標(biāo)的影響：取齡期相同并生長整齊的三眠蠶,隨機(jī)分為8組,即空白對照組,火麻仁油高、中、低劑量組,火麻仁甾醇高、中、低劑量組,陽性對照組。使用涂抹法將藥液涂抹于新鮮桑葉上,4齡期喂食 3次,5齡期內(nèi)喂食 6次；用火麻仁油及火麻仁植物甾醇對家蠶血淋巴和小鼠血清中 SOD、MD

4、A及GSH-PX的水平進(jìn)行測定,設(shè)立空白對照組、陽性對照組、火麻仁油及甾醇各高、中、低三劑量組；火麻仁油和植物甾醇對家蠶和小鼠能量代謝方面的影響：用呼吸測定儀測定家蠶和小鼠O2、CO2含量的變化,計算呼吸熵,與空白組進(jìn)行對比。
　　結(jié)果：
　　正交法優(yōu)選火麻仁油中植物甾醇最佳提取工藝：通過實驗發(fā)現(xiàn)樣品量,皂化時間和萃取溶劑用量中,樣品量有顯著影響。從直觀分析表確定火麻仁油中植物甾醇的最佳提取工藝是A 2 B 3 C

5、3,即火麻仁油 50m L ,皂化時間90min,萃取劑乙醚300m L?；瘜W(xué)試劑特征顯色法和紫外光譜分析均表明提取物為植物甾醇；火麻仁油及植物甾醇對體外清除自由基的測定：對于清除 DPPH*自由基的測定,火麻仁甾醇的清除率最高達(dá)到94.13%,IC50(半數(shù)清除率)為0.47 mg/mL,維生素C的最高清除率為95.36%,IC50為0.24 mg/mL；對于清除亞硝酸鹽的測定,火麻仁甾醇的清除率最高達(dá)到85.04%, IC50為0.

6、70mg/mL,維生素C的清除率最高為94.07%,IC50為0.17mg/mL；火麻仁油及植物甾對家蠶壽命和抗氧化指標(biāo)的影響：火麻仁油及植物甾醇高、中、低劑量組均對家蠶幼蟲生存期較空白對照組明顯延長( P<0.01或 P<0.05),其中火麻仁甾醇能顯著延長家蠶全生存期(P<0.01或P<0.05)。與空白組相比,火麻仁油及甾醇均能顯著延長五齡期家蠶耐饑餓時間(P<0.01)；火麻仁油及火麻仁甾醇均能顯著升高家蠶血淋巴中SOD、GSH

7、的水平(P<0.01),均能顯著降低血淋巴中MDA的水平(P<0.01)；火麻仁油及植物甾醇對小鼠抗氧化指標(biāo)的影響：火麻仁油和植物甾醇組中的高劑量組能顯著升高SOD的水平(P<0.01),其中油高組并能顯著降低血清MDA的水平(P<0.01)。油中劑量組和植物甾醇中、低劑量能降低 MDA的水平(P<0.05)；火麻仁油及植物甾醇對家蠶和小鼠能量代謝的影響：火麻仁油組和植物甾醇組的家蠶呼吸熵值均高于空白組(P<0.01),而小鼠的呼吸熵值

8、均低于空白組。家蠶實驗中火麻仁油組代謝率高于空白組,而植物甾醇組代謝率低于空白組( P<0.05)。小鼠實驗中火麻仁油組和植物甾醇組的代謝率均低于空白組。
　　結(jié)論：
　　本文得出的正交實驗方法可用于火麻仁油中植物甾醇的提取,為接下來藥理實驗打下奠定基礎(chǔ)?；鹇槿淑薮紝?NaNO2和 DPPH*自由基均有較好地清除作用,火麻仁油及甾醇能提高家蠶和小鼠的抗氧化能力,研究結(jié)果提示：火麻仁延緩衰老等作用與增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力