衰老細胞模型構建及抗衰老活性物質初步篩選研究.pdf

1、衰老被定義為生理完整性的逐漸損失，是生命過程的必然規(guī)律，這種退化是人類病理學的主要危害因素，包括癌癥、糖尿病、心血管和神經退行性疾病。近五年，衰老細胞的累積及其分泌表征（SASP）受到了越來越多的關注，基于衰老細胞和腫瘤細胞類似的“促幸存抑凋亡”機制，開展靶向清除衰老細胞的藥物“senolytics”的發(fā)現(xiàn)是目前抗衰老研究的重點之一。
　　本文主要研究工作有：
　　1.建立鼠腎小管上皮細胞衰老模型。利用鼠腎小管上皮原代細胞自

2、身易衰老的特點，采用連續(xù)培養(yǎng)的方法監(jiān)測細胞的衰老進程。通過衰老相關β-半乳糖苷酶（SA-βgal）染色（SABG染色法）得到不同培養(yǎng)天數的細胞衰老比例，通過碘化丙啶染色、流式細胞儀檢測觀察細胞周期阻滯的情況。結果顯示培養(yǎng)第7~8天，細胞半數衰老，第9天衰老比例>90%，得到細胞衰老比例隨培養(yǎng)時間的變化曲線，同時G0/G1期細胞比例增多。本模型代替細胞系的應用考察了壓力誘導的早衰（SIPS）模型，解決了目前急性/慢性亞細胞毒性難以區(qū)分損傷

3、及衰老的問題。
　　2.應用建立的細胞衰老模型，本文檢測了19種藥物對第7至第9天細胞衰老進程的影響。發(fā)現(xiàn)MW組合物100μg/mL給藥可以明顯延緩細胞的衰老，衰老比例從92.23%降至63.55%，降低約29%。已知的“senolytics”ABT263在0.5-2.5μM濃度范圍內給藥即可發(fā)揮明顯的靶向清除作用。5μM氨磷汀二硫化物、250μg/mL心肌肽、250μM桂哌齊特也表現(xiàn)出類似于ABT263的靶向清除作用。
　

4、　3.應用腎小管內皮原代及衰老細胞篩選五種 senolytics候選藥物，結果顯示5μM ABT263（陽性對照）對正常細胞存活率與衰老細胞存活率的比值（NC/SC）為3.5（>1），10μM氨磷汀二硫化物NC/SC=89，1000μM桂哌齊特NC/SC=4.67。表現(xiàn)出優(yōu)異的抗衰老細胞靶向性。
　　4.另外發(fā)現(xiàn)心肌肽、氨磷汀硫醇及氨磷汀二硫化物具有促進體細胞增殖的特性，可以重建細胞數量，與清除衰老細胞過程協(xié)同達到抗衰老的目的。心