聚丙烯酰胺凝膠 配制方法

1、5TBE（組份濃度：5TBE，pH8.3；配制量：1L）：稱取53.9gTris，27.5g硼酸，量取20ml0.5molLEDTA（pH8.0），置于1L燒杯中；加入約800ml超純水，充分?jǐn)嚢枞芙猓患映兯畬⑷芤憾ㄈ葜?L；室溫保存。10%過硫酸銨（組份濃度：10%(WV)過硫酸銨；配制量：10ml）：稱取1g過硫酸銨，置于10～50ml燒杯中；加入約8ml超純水，攪拌溶解；加超純水將溶液定容至10ml；4℃保存（保存時(shí)間為2周左右

2、，超過期限過硫酸銨將失去催化作用）。30%丙烯酰胺（組份濃度：30%(WV)丙烯酰胺；配制量：1L）：稱取290g丙烯酰胺，10gNN亞甲基雙丙烯酰胺，置于1L燒杯中；加入約600ml超純水，水浴加熱至37℃，充分?jǐn)嚢柚寥芙猓患映兯畬⑷芤憾ㄈ葜?L，用0.45μm濾膜過濾除去雜質(zhì)；并檢測(cè)該溶液pH值應(yīng)不大于7；棕色瓶4℃保存。0.1%AgNO3（組份濃度：0.1%(WV)AgNO3；配制量：1L）：稱取1gAgNO3，置于1L燒杯中；

3、加入約800ml超純水，；加超純水將溶液定容至1L；棕色瓶室溫保存。顯色液（組份濃度：2%(WV)NaOH，0.04%(WV)Na2CO3，0.4%(WV)37%甲醛；配制量：1L）：稱取20gNaOH，0.4gNa2CO3，置于1L燒杯中；加入約800ml超純水，充分?jǐn)嚢枞芙?；?ml37%甲醛溶液，加超純水將溶液定容至1L；室溫保存。10%冰乙酸（組份濃度：10%冰乙酸；配制量：1L）：量取100ml冰乙酸，置于1L燒杯中；加入約8

4、00ml超純水，攪拌混勻；加超純水將溶液定容至1L；室溫保存。2.2.6電泳檢測(cè)電泳檢測(cè)2.2.6.1玻璃板清洗玻璃板清洗首先用去污粉將電泳用玻璃板、膠墊、梳子等反復(fù)清洗；然后用Ⅲ級(jí)蒸餾水漂洗2～3次，直至玻璃板表面出現(xiàn)均勻水膜，既不聚成水滴，也不成股流下；再用超純水漂洗1次，晾干；最后用無水乙醇擦拭，晾干備用[74]。2.2.6.2緩沖液貯液和凝膠母液的制備緩沖液貯液和凝膠母液的制備緩沖液貯液用5TBE，具體配制方法見2.1.2.2，

5、用時(shí)稀釋5倍。凝膠母液用30%丙烯酰胺，具體配制方法見2.1.2.2。（4）加入約200ml顯色液，輕搖5～10min，直至出現(xiàn)清晰帶型，倒掉液體；（5）加入約200ml超純水，輕搖15sec，倒掉液體；（6）加入約200ml10%冰乙酸，固定；（7）用BioRad紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察，照相以記錄電泳結(jié)果。1.4.3聚丙烯酰胺凝膠改進(jìn)的銀染方法(1)電泳結(jié)束后切斷電源從電泳槽中倒出緩沖液然后取下膠板將凝膠從玻板中取出放入裝有蒸餾水的瓷盤