聚丙烯酰胺凝膠電泳

1、聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳PolyacrylaeGelElectrophesis，PAGE一、一、一、一、PAGPAGPAGPAG的的組成組成組成組成??PAGPAGPAG是由是由是由是由丙烯酰胺丙烯酰胺丙烯酰胺丙烯酰胺（（acrylaeacrylaeacrylae，，AcrAcrAcr））單體單體單體單體和和NN，，N’N’N’亞甲雙丙烯酰亞甲雙丙烯酰亞甲雙丙烯酰亞甲雙丙烯酰胺胺（（NN，，NN，，N’N’N’，，N’met

2、hyleneN’methyleneN’methylenebixacrylaebixacrylaebixacrylae，，BisBisBis））交聯(lián)劑交聯(lián)劑交聯(lián)劑交聯(lián)劑通過自通過自通過自通過自由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。由基聚合而成的一種多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。??AcrAcrAcrBisBisBis??多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)多孔三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)多孔三維網(wǎng)狀結(jié)

3、構(gòu)二、二、二、二、PAGPAGPAGPAG的的聚聚合合??PAGPAGPAGPAG的聚合反應(yīng)需要催化劑的聚合反應(yīng)需要催化劑的聚合反應(yīng)需要催化劑的聚合反應(yīng)需要催化劑————氧化還原系統(tǒng)作用，使氧化還原系統(tǒng)作用，使氧化還原系統(tǒng)作用，使氧化還原系統(tǒng)作用，使AcrAcrAcrAcr單體帶有單體帶有單體帶有單體帶有游離基，從而與游離基，從而與游離基，從而與游離基，從而與BisBisBisBis進(jìn)行聚合。進(jìn)行聚合。進(jìn)行聚合。進(jìn)行聚合。（一）化學(xué)聚合

4、：（一）化學(xué)聚合：（一）化學(xué)聚合：（一）化學(xué)聚合：APTEMEDAPTEMEDAPTEMED系統(tǒng)系統(tǒng)系統(tǒng)系統(tǒng)??過硫酸胺（過硫酸胺（過硫酸胺（過硫酸胺（AmmoniumAmmoniumAmmoniumpersulfatepersulfatepersulfate，，APAPAP））作為催化劑，四甲基乙二作為催化劑，四甲基乙二作為催化劑，四甲基乙二作為催化劑，四甲基乙二胺（胺（胺（胺（TEMEDTEMEDTEMED））為加速劑為加速劑為加速

5、劑為加速劑??APAPAP在水溶液中能產(chǎn)生游離基在水溶液中能產(chǎn)生游離基在水溶液中能產(chǎn)生游離基在水溶液中能產(chǎn)生游離基SOSOSO44222，，使丙烯酰胺單體的雙鍵打開，活使丙烯酰胺單體的雙鍵打開，活使丙烯酰胺單體的雙鍵打開，活使丙烯酰胺單體的雙鍵打開，活化形成自由基丙烯酰胺，然后游離化形成自由基丙烯酰胺，然后游離化形成自由基丙烯酰胺，然后游離化形成自由基丙烯酰胺，然后游離AcrAcrAcr和和BisBisBis作用就能聚合形成凝作用就能聚

6、合形成凝作用就能聚合形成凝作用就能聚合形成凝膠。膠。膠。膠。??TEMEDTEMEDTEMED的游離堿基能促進(jìn)的游離堿基能促進(jìn)的游離堿基能促進(jìn)的游離堿基能促進(jìn)APAPAP的形成的形成的形成的形成SOSOSO44222。。??注意：注意：注意：注意：??須在堿性條件下聚合須在堿性條件下聚合須在堿性條件下聚合須在堿性條件下聚合??分子氧存在，聚合不完全，須去除分子氧，隔絕氧分子氧存在，聚合不完全，須去除分子氧，隔絕氧分子氧存在，聚合不完全，

7、須去除分子氧，隔絕氧分子氧存在，聚合不完全，須去除分子氧，隔絕氧??升高溫度能提高聚合，降低溫度能延遲聚合升高溫度能提高聚合，降低溫度能延遲聚合升高溫度能提高聚合，降低溫度能延遲聚合升高溫度能提高聚合，降低溫度能延遲聚合（二）光聚合：核黃素（二）光聚合：核黃素（二）光聚合：核黃素（二）光聚合：核黃素TEMEDTEMEDTEMED系統(tǒng)系統(tǒng)系統(tǒng)系統(tǒng)三、三、三、三、PAGPAGPAGPAG的濃度與孔徑的關(guān)系的濃度與孔徑的關(guān)系的濃度與孔徑的關(guān)系

8、的濃度與孔徑的關(guān)系??關(guān)系：關(guān)系：關(guān)系：關(guān)系：PAGPAGPAGPAG孔徑主要受凝膠總濃度（孔徑主要受凝膠總濃度（孔徑主要受凝膠總濃度（孔徑主要受凝膠總濃度（T%T%T%T%））的控制。交聯(lián)度的控制。交聯(lián)度的控制。交聯(lián)度的控制。交聯(lián)度C%C%C%C%的大小則的大小則的大小則的大小則與凝膠篩孔的最大直徑有關(guān)與凝膠篩孔的最大直徑有關(guān)與凝膠篩孔的最大直徑有關(guān)與凝膠篩孔的最大直徑有關(guān)??T%T%T%T%————100ml100ml100ml10

9、0ml凝膠溶液中含有凝膠溶液中含有凝膠溶液中含有凝膠溶液中含有AcrAcrAcrAcr和和BisBisBisBis的總克數(shù)的總克數(shù)的總克數(shù)的總克數(shù)T%T%T%T%越大，凝膠孔徑越小，適用于分離分子量較小的物質(zhì)。越大，凝膠孔徑越小，適用于分離分子量較小的物質(zhì)。越大，凝膠孔徑越小，適用于分離分子量較小的物質(zhì)。越大，凝膠孔徑越小，適用于分離分子量較小的物質(zhì)。分離膠只有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，根據(jù)各蛋白質(zhì)所帶電荷不分離膠只有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，

10、根據(jù)各蛋白質(zhì)所帶電荷不分離膠只有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，根據(jù)各蛋白質(zhì)所帶電荷不分離膠只有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，根據(jù)各蛋白質(zhì)所帶電荷不同、分子大小不同而分離同、分子大小不同而分離同、分子大小不同而分離同、分子大小不同而分離五、五、五、五、PAGEPAGEPAGEPAGE的的特特點點1.1.1.1.具有分子篩效應(yīng)，分辨率高具有分子篩效應(yīng)，分辨率高具有分子篩效應(yīng)，分辨率高具有分子篩效應(yīng)，分辨率高2.2.2.2.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，分子結(jié)構(gòu)中富含酰胺基

11、具有穩(wěn)定的親水基團(tuán)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，分子結(jié)構(gòu)中富含酰胺基具有穩(wěn)定的親水基團(tuán)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，分子結(jié)構(gòu)中富含酰胺基具有穩(wěn)定的親水基團(tuán)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，分子結(jié)構(gòu)中富含酰胺基具有穩(wěn)定的親水基團(tuán)3.3.3.3.凝膠不帶電荷，消除了電滲現(xiàn)象凝膠不帶電荷，消除了電滲現(xiàn)象凝膠不帶電荷，消除了電滲現(xiàn)象凝膠不帶電荷，消除了電滲現(xiàn)象4.4.4.4.機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，在一定范圍內(nèi)為無色透明機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，在一定范圍內(nèi)為無色透明機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，在一定范圍內(nèi)為無色

12、透明機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，在一定范圍內(nèi)為無色透明5.5.5.5.網(wǎng)孔可調(diào)節(jié)網(wǎng)孔可調(diào)節(jié)網(wǎng)孔可調(diào)節(jié)網(wǎng)孔可調(diào)節(jié)小小結(jié)結(jié)??掌握（不連續(xù)）掌握（不連續(xù)）掌握（不連續(xù)）掌握（不連續(xù)）PAGEPAGEPAGE的原理的原理的原理的原理??掌握影響掌握影響掌握影響掌握影響PAGEPAGEPAGE遷移率的因素遷移率的因素遷移率的因素遷移率的因素??掌握掌握掌握掌握PAGEPAGEPAGE的操作注意點、試劑作用的操作注意點、試劑作用的操作注意點、試劑作用的操

13、作注意點、試劑作用??熟悉熟悉熟悉熟悉PAGPAGPAG的聚合的聚合的聚合的聚合思思考考題題??名詞解釋名詞解釋名詞解釋名詞解釋1.1.1.凝膠總濃度凝膠總濃度凝膠總濃度凝膠總濃度2.2.2.凝膠交聯(lián)度凝膠交聯(lián)度凝膠交聯(lián)度凝膠交聯(lián)度??問答題問答題問答題問答題1.1.1.與與CAMECAMECAME相比，相比，相比，相比，PAGEPAGEPAGE有哪些特點。有哪些特點。有哪些特點。有哪些特點。2.2.2.試比較試比較試比較試比較CAME