胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng) 2016.07.21

1、1胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離，原代與繼代培養(yǎng)及鑒定胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離，原代與繼代培養(yǎng)及鑒定劉亭劉亭2016.7.212016.7.21目錄目錄前言................................................................21分離制備PMSC組織的選取...........................................32臍帶，胎盤MSC的分離與純化.........

2、...............................52.1胎盤組織的獲取，存儲與清洗...................................522臍帶，胎盤MSC的分離及純化方法..............................63原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)...............................................1031培養(yǎng)基.......................

3、...............................1032培養(yǎng)密度....................................................1133培養(yǎng)條件....................................................1134換液........................................................1135傳代培

4、養(yǎng)...................................................1236細(xì)胞形態(tài)與生長速度..........................................1237MSC的凍存與復(fù)蘇：..........................................124細(xì)胞表面抗原檢測..............................................

5、...135生長曲線.........................................................136細(xì)胞周期.........................................................137分化潛能.........................................................13參考文獻(xiàn)...................

6、........................................13附件1不同實驗室從臍帶血，臍帶和胎盤等各組織中分離MSC的方法.......15臍帶血.........................................................15臍帶...........................................................15羊膜...........

7、................................................17絨毛膜.........................................................18蛻膜層.........................................................18胎盤............................................

8、...............19整體灌注法.....................................................20附件2背景知識....................................................20附件3PMSC實驗所需試劑............................................213臨床應(yīng)用中受到限制。其他組織中，如動員的外周

9、血、乳牙、臍帶、臍血也存在間充質(zhì)干細(xì)胞，然而，從這些組織中獲得的細(xì)胞數(shù)量較為有限。以上因素，都限制了間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程和臨床中的運用。目前胎盤或臍帶屬于臨床廢棄物，容易獲得，并且無污染，取材研究和應(yīng)用基本無倫理學(xué)爭議，研究表明胎盤或臍帶含有豐富的MSC。有研究表明PMSC比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞更容易分離培養(yǎng)，細(xì)胞活性更好，還可誘導(dǎo)分化成脂肪，成骨等多種細(xì)胞。并且這些胎盤源的間充質(zhì)干細(xì)胞（胎盤源的間充質(zhì)干細(xì)胞（placentaderive

10、dmesenchymalstemcells，PMSCs）具有極低的免疫原性，大多數(shù)患者對于胎盤或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有天然的免疫耐受，因此，人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在研究相關(guān)疾病的動物模型中，即便是人動物模型間的異種間移植，由于存在天然的免疫耐受，對實驗研究的結(jié)果影響甚小，這對于很多疾病研究的模型建立具有很好的作用。目前MSC主要臨床應(yīng)用于抑制移植物抗宿主反應(yīng)。動物模型研究結(jié)果表明PMSC對子宮內(nèi)膜損傷（劉芳，2013），大鼠肝組織損傷（宮黎明

11、等，2011），APP轉(zhuǎn)基因鼠阿爾茨海默?。ü鶃喣械?，2009）均有療效，也可以用于構(gòu)建組織工程皮膚（徐彪等，2013）。所以，綜合充分利用胎盤和臍帶作為間充質(zhì)干細(xì)綜合充分利用胎盤和臍帶作為間充質(zhì)干細(xì)胞新來源，優(yōu)化分離純化以及傳代培養(yǎng)條件，加快細(xì)胞繁殖速度，降低培養(yǎng)成胞新來源，優(yōu)化分離純化以及傳代培養(yǎng)條件，加快細(xì)胞繁殖速度，降低培養(yǎng)成本以高效率獲取大量的本以高效率獲取大量的PMSC對于的各種疾病實驗研究及醫(yī)院各個科室的臨床對于的各種疾病

12、實驗研究及醫(yī)院各個科室的臨床應(yīng)用，都具有重要意義。應(yīng)用，都具有重要意義。1分離制備分離制備PMSC組織的選取組織的選取胎盤起源于胚胎發(fā)育期胚外中胚層，人足月娩出的胎盤由羊膜層、絨毛膜層和蛻膜層組成。從臍帶血臍帶血（于海微等，2009；管英華等，2011），臍帶臍帶（徐燕等，2009；韓之波等，2012；管英華等，2011；李艷琪等，2014；趙琳等，2016），整個胎盤整個胎盤（陸琰等，2009；沙文瓊等，2010；劉洋等，2015；賴