改良的間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)方法.pdf

1、第一部分：改良的人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)方法
　　目的:建立人臍帶間充質(zhì)干細胞(hUCMSCs)的分離和培養(yǎng)方法。
　　方法:用酶消化法、傳統(tǒng)組織塊法和改良組織塊法從人臍帶華通膠中分離間充質(zhì)干細胞,對比三種方法所培養(yǎng)的原代細胞生長狀態(tài)及數(shù)量;流式細胞儀檢測改良組織塊法所培養(yǎng)細胞的免疫表型;用不同的培養(yǎng)體系誘導改良法所培養(yǎng)細胞向成骨細胞及成脂細胞分化,并對其進行鑒定。
　　結(jié)果:改良的hUCMSCs的培養(yǎng)方法所培養(yǎng)的細胞

2、純度更高,改良組織塊法所獲得的原代細胞數(shù)量是酶消化法的2倍左右,是傳統(tǒng)組織塊法的約20倍,細胞呈長梭形生長;高表達CD90、CD44,不表達CD45、CD34;茜素紅染色及油紅O染色證實了hUCMSCs可分化為脂肪細胞和成骨細胞。
　　結(jié)論:建立了hUCMSCs的培養(yǎng)新方法,證實了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潛能,為其在疾病治療方面的應用提供支持。
　　第二部分：改良的BALB/C小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)方法

3、　　目的:建立BALB/C小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)的培養(yǎng)方法。
　　方法:用全骨髓培養(yǎng)法和改良的全骨髓培養(yǎng)法從BALB/C小鼠脛骨和股骨中分離間充質(zhì)干細胞,對比兩種方法所培養(yǎng)原代細胞的生長情況及數(shù)量;流式細胞儀檢測改良法所培養(yǎng)細胞的免疫表型;用成骨誘導培養(yǎng)體系誘導改良法所培養(yǎng)的BMSCs向成骨細胞分化,并對其進行鑒定。
　　結(jié)果:改良的全骨髓培養(yǎng)法所培養(yǎng)的原代細胞數(shù)量上較傳統(tǒng)方法增加了約50％,細胞生長更快;流式細