轉(zhuǎn)基因考試部分

1、名詞解釋：名詞解釋：轉(zhuǎn)基因動物：轉(zhuǎn)基因動物：英文名稱：transgenicanimal定義1：通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)獲得的整合有外源基因的動物個(gè)體。定義2：基因組中整合的外源基因能夠表達(dá)的一類動物。概念：遺傳的基本物質(zhì)是DNA，基因則是位于染色體上有遺傳效應(yīng)的DNA片段，對于儲存在生物全套染色體中的全部遺傳信息，可稱其為基因組。由于不同種類、不同個(gè)體的生物基因組成是不同的，因此對動物個(gè)體來說，非自身的基因成分屬于外源基因，如果把外源基因整合或

2、導(dǎo)入動物染色體基因中，那么這個(gè)外源基因就被稱為轉(zhuǎn)基因(transgene)(即轉(zhuǎn)移來的基因)，這種動物就是轉(zhuǎn)基因動物(transgenicanimals)。轉(zhuǎn)基因動物是指將特定的外源基因?qū)珓游锸芫鸦蚺咛?，使之穩(wěn)定整合于動物的染色體基因組并能遺傳給后代的一類動物。轉(zhuǎn)基因動物所有的細(xì)胞均整合有外源基因，并具有將外源基因遺傳給子代的能力，若動物只有部分組織細(xì)胞整合有外源基因，則稱為嵌合體動物，這類動物只有在整合了外源基因的“部分組織細(xì)胞”

3、恰為生殖細(xì)胞時(shí)，才能將其攜帶的外源基因遺傳給子代。顯微注射法：顯微注射法：1、簡介顯微注射法（microinjection）是利用管尖極細(xì)（0.1至0.5μm）的玻璃微量注射針，將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養(yǎng)的細(xì)胞中，然后藉由宿主基因組序列可能發(fā)生的重組（rearrangement）、缺失（deletion）、復(fù)制（duplication）或易位（translocation）等現(xiàn)象而使外源基因嵌入宿主的染色體內(nèi)。2、技術(shù)要求這種

4、顯微注射術(shù)的程序，需有相當(dāng)精密的顯微操作設(shè)備，制造長管尖時(shí)，需用微量吸管拉長器（micropipettepuller），注射時(shí)需有固定管尖位置的微量操作器。這種技術(shù)的長處為任何DNA在原則上均可傳入任何種類的細(xì)胞內(nèi)。此法已成功運(yùn)用于包括小鼠、魚、大鼠、兔子及許多大型家畜，如牛、羊、豬等基因轉(zhuǎn)殖動物。顯微注射：顯微注射：英文名稱：microinjection定義1：在顯微鏡下操作的微量注射技術(shù)。可將細(xì)胞的某一部分(如細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器

5、)或外源物質(zhì)(如外源基因、DNA片段、信使核糖核酸、蛋白質(zhì)等)通過玻璃毛細(xì)管拉成的細(xì)針，注射到細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)。是研究各種生物分子的作用、制作轉(zhuǎn)基因動物、克隆動物等的重要技術(shù)。定義2：用顯微注射儀將外源基因注入細(xì)胞或配子的技術(shù)。所屬學(xué)科：水產(chǎn)學(xué)（一級學(xué)科）；水產(chǎn)生物育種學(xué)（二級學(xué)科）定義3：因子后，可增強(qiáng)基因表達(dá)。定義3：增強(qiáng)真核基因轉(zhuǎn)錄的一類調(diào)節(jié)序列。增強(qiáng)子概念：指增加同它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率的DNA序列。增強(qiáng)子是通過啟動子來增加轉(zhuǎn)錄的

6、。有效的增強(qiáng)子可以位于基因的5’端，也可位于基因的3’端，有的還可位于基因的內(nèi)含子中。增強(qiáng)子的效應(yīng)很明顯，一般能使基因轉(zhuǎn)錄頻率增加10～200倍，有的甚至可以高達(dá)上千倍。例如，人珠蛋白基因的表達(dá)水平在巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus，CMV)增強(qiáng)子作用下可提高600～1000倍。增強(qiáng)子的作用同增強(qiáng)子的取向(5’一3’或3’一5’)無關(guān)，甚至遠(yuǎn)離靶基因達(dá)幾千kb也仍有增強(qiáng)作用。增強(qiáng)子的分類：增強(qiáng)子可分為細(xì)胞專一性增強(qiáng)子和誘導(dǎo)性增

7、強(qiáng)子兩類：①組織和細(xì)胞專一性增強(qiáng)子。許多增強(qiáng)子的增強(qiáng)效應(yīng)有很高的組織細(xì)胞專一性，只有在特定的轉(zhuǎn)錄因子(蛋白質(zhì))參與下，才能發(fā)揮其功能。②誘導(dǎo)性增強(qiáng)子。這種增強(qiáng)子的活性通常要有特定的啟動子參與。例如，金屬硫蛋白基因可以在多種組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，又可受類固醇激素、鋅、鎘和生長因子等的誘導(dǎo)而提高轉(zhuǎn)錄水平。增強(qiáng)子的特點(diǎn)作用：增強(qiáng)子能大大增強(qiáng)啟動子的活性。增強(qiáng)子有別于啟動子處有兩點(diǎn):[1]增強(qiáng)子對于啟動子的位置不固定，而能有很大的變動[2]它能在兩個(gè)

8、方向產(chǎn)生相作用。一個(gè)增強(qiáng)子并不限于促進(jìn)某一特殊啟動子的轉(zhuǎn)錄，它能刺激在它附近的任一啟動子。首先被發(fā)現(xiàn)的增強(qiáng)子是SV40增強(qiáng)子。兩個(gè)增強(qiáng)子位于基因組的兩個(gè)串連的72nbp重復(fù)中，約在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游200bp處，每個(gè)72bp重復(fù)中有一個(gè)。缺失實(shí)驗(yàn)顯示兩個(gè)重復(fù)缺失一個(gè)并不產(chǎn)生什么影響，而如兩個(gè)均缺失即將大大降低活體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄。有人發(fā)現(xiàn)，如果將β珠蛋白基因放在含有72bp重復(fù)的DNA分子中，它的轉(zhuǎn)錄作用在活體內(nèi)將增高約200倍以上，甚至當(dāng)此72b

9、p順序位于離轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游1400bp或下游3000bp時(shí)仍有作用。各個(gè)基因中的增強(qiáng)子順序差別較大，但有一個(gè)基本的核心順序(cesequence)：AAAGGTGTGGGTTTGG增強(qiáng)子具有組織特異性：例如免疫球蛋白基因的增強(qiáng)子只有在B淋巴胞內(nèi)，活性才最高。除此以外，在胰島素基因和胰凝乳蛋白酶基因的增強(qiáng)子中都發(fā)現(xiàn)了有很強(qiáng)的組織特異性。此外，所有的增強(qiáng)子中均有一段由交替的嘧啶嘌呤殘基組成的DNA，這種DNA極易形成ZDNA型；故有人認(rèn)為在形

10、成一小段ZDNA后，增強(qiáng)子才有功能。在酵母中有類似增強(qiáng)子的順序，稱為上游激活順序(UAS)。UAS能向兩個(gè)方向起作用。并位于啟動子上游的任何距離處，但在啟動子下游則無作用(有別于一般的增強(qiáng)子)。小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)DNA的轉(zhuǎn)錄可受糖類固醇激素的刺激。這個(gè)能受激素影響的順序位于轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游約100bp處。此順序能和激素及其蛋白受體組成的復(fù)合物相結(jié)合。當(dāng)將此順序放在某基因的啟動子的任一方面(即上游或下游)和各種不同的距離時(shí)，它仍能刺

11、激該基因的轉(zhuǎn)錄。所以增強(qiáng)子激活作用可能是糖類固醇能調(diào)控一組靶基因的機(jī)制:糖類固醇激素進(jìn)入細(xì)胞后即與其受體結(jié)合。結(jié)合作用激活受體，使其能識別存在于增強(qiáng)子中的共同順序，進(jìn)而激活了在增強(qiáng)子附近能對糖類固醇起反應(yīng)的基因。即當(dāng)糖類固醇受體復(fù)合物和增強(qiáng)子結(jié)合時(shí)，其附近的啟動子即起始轉(zhuǎn)錄。動物克?。簞游锟寺。憾x：動物克隆是一種通過核移植過程進(jìn)行無性繁殖的技術(shù)。發(fā)育早期的動物胚胎細(xì)胞，或成年動物的體細(xì)胞，經(jīng)顯微手術(shù)移植到去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中之后，在