sds聚丙烯酰胺凝膠電泳

1、聚丙烯酰氨凝膠電泳作用原理聚丙烯酰胺凝膠電泳是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)，它有兩種形式，一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠，蛋白質(zhì)在電泳中保持完整的狀態(tài)，蛋白在其中依三種因素分開(kāi)：蛋白大小，形狀和電荷。而SDSPAGE僅根據(jù)蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個(gè)技術(shù)首先是1967年由shapiro建立，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強(qiáng)還原劑后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小，電荷因素可以忽視。SDS是陰離子去污

2、劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。而強(qiáng)還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過(guò)了蛋白原有的蛋白量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異。SDSPAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，于連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比，能夠有較高的分辨率。濃縮膠的

3、作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過(guò)大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個(gè)狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品液和濃縮膠選TRISHCL緩沖液，電極液選TRIS甘氨酸。電泳開(kāi)始后，HCL解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，因此一起向正極移動(dòng)，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。電泳開(kāi)始時(shí)氯離子泳動(dòng)率最大，超過(guò)蛋白，因此在后面形成低電導(dǎo)區(qū)，而電場(chǎng)強(qiáng)度與低電導(dǎo)區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場(chǎng)強(qiáng)度，

4、使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動(dòng)，形成以穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動(dòng)界面附近，濃縮成一中間層。SDSSDS聚丙烯酰胺凝膠電泳原理聚丙烯酰胺凝膠電泳原理采用十二烷基硫酸鈉聚丙稀酰胺凝膠電泳（SDSPAGE，polyacrylaegelelectrophesis）方法可對(duì)蛋白質(zhì)的組分進(jìn)行分離，并可精確測(cè)得蛋白質(zhì)的分子量。常用的方法為SDSPAGE不連續(xù)系統(tǒng)?；驹恚壕郾□０肥怯杀□０罚╝crylae）和NN’亞甲基雙丙稀酰胺（NN’met

5、hylenebisacrylae）經(jīng)共聚合而成。此聚合過(guò)程是由四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）和過(guò)硫酸胺（ammoniumpersulfate，AP）激發(fā)的。被激活的單體和未被激活的單體開(kāi)始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機(jī)地接上雙丙稀酰胺，使多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀?；铀俦０放c雙丙烯酰胺的聚合。加入加速劑TEMED后聚合馬上開(kāi)始，應(yīng)立即將凝膠

6、混勻，迅速灌膠。保存條件：4℃保存。注意事項(xiàng)：易燃，有腐蝕性，請(qǐng)注意防護(hù)。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。過(guò)硫酸銨分子式:(NH4)2S2O8分子量:228.20性狀：過(guò)硫酸銨是一種白色、無(wú)味晶體，常作強(qiáng)氧化劑使用，也可用作單體聚合引發(fā)劑。它幾乎不吸潮，由于能達(dá)到很高的純度而具有特別好的穩(wěn)定性，便于儲(chǔ)存。另外，它還具有使用方便、安全等優(yōu)點(diǎn)。儲(chǔ)存及使用注意事項(xiàng)：過(guò)硫酸銨屬于非易燃品，但由于能釋放氧而有助燃作用，因此必須在

7、一定條件下儲(chǔ)存。首先必須存放在干燥、密閉的容器中，其次應(yīng)避免陽(yáng)光直射、熱源、潮濕等不利因素。另外，一些雜質(zhì)如臟物、鐵銹、少量金屬以及還原劑可能引起過(guò)硫酸銨的分解，在存放和使用過(guò)程中也必須注意。由于潮濕的過(guò)硫酸銨粉末及其水溶液有漂白和輕微的腐蝕作用，因此使用過(guò)程中應(yīng)避免眼睛、皮膚和衣物直接與其接觸。過(guò)硫酸銨的應(yīng)用：過(guò)硫酸銨提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基。須新鮮配制。過(guò)硫酸銨是乳膠或丙烯酸單體聚合液、醋酸乙烯、氯乙烯等產(chǎn)品的

8、引發(fā)劑，同時(shí)也是苯乙烯、丙烯腈、丁二烯等膠體發(fā)生共聚作用的引發(fā)劑。過(guò)硫酸銨TEMED（四甲基乙二胺）系統(tǒng)：在Acr和Bis的溶液中放入這個(gè)催化系統(tǒng)后，過(guò)硫酸銨[（NH4）2S2O8]產(chǎn)生出游離氧原子使單體成為具有游離基的狀態(tài)，從而發(fā)生聚合作用。聚合的初速度和過(guò)硫酸銨濃度的平方根成正比。這種催化系統(tǒng)需要在堿性條件下進(jìn)行。例如，在pH8.8條件下7％的丙烯酰胺溶液30分鐘就能聚合完畢；在pH4.3時(shí)聚合很慢，要90分鐘才能完成。溫度與聚合的