超級(jí)延伸復(fù)合體與wnt信號(hào)通路

1、超級(jí)延伸復(fù)合體（SEC）與Wnt信號(hào)通路在小鼠內(nèi)耳干細(xì)胞再生為毛細(xì)胞過(guò)程中的作用,,項(xiàng)目背景,內(nèi)耳毛細(xì)胞損傷是導(dǎo)致聽(tīng)力損傷的重要原因之一。最理想的治療神經(jīng)性耳聾方法通過(guò)修復(fù)毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)元突觸使其再生，達(dá)到耳蝸結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)，從而在根本上恢復(fù)聽(tīng)力。有研究表明，誘導(dǎo)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為毛細(xì)胞是修復(fù)毛細(xì)胞損傷的一種較為可行的潛在方式。在內(nèi)耳毛細(xì)胞和支持細(xì)胞中，SEC的關(guān)鍵組成部分AFF4,ELL3有較高水平的表達(dá)。假設(shè)SEC可以與內(nèi)

2、耳干細(xì)胞相互作用，調(diào)控內(nèi)耳干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為毛細(xì)胞，從而使得已經(jīng)受損的毛細(xì)胞得以再生，恢復(fù)聽(tīng)力功能。Wnt是一個(gè)分泌蛋白家族，它調(diào)控不同的發(fā)育過(guò)程。其信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的增殖、分化具有調(diào)控作用。,2,耳蝸結(jié)構(gòu)與功能,3,耳蝸結(jié)構(gòu)圖,超級(jí)延伸復(fù)合體結(jié)構(gòu)和功能,4,SEC結(jié)構(gòu)圖,研究?jī)?nèi)容,1.通過(guò)western-blot檢驗(yàn)耳蝸中SEC蛋白表達(dá)情況,2.通過(guò)提取內(nèi)耳RNA檢驗(yàn)耳蝸中SEC基因的表達(dá),耳蝸中SEC基因的表達(dá)情況,耳蝸中SEC蛋白表達(dá)情

3、況,5,研究?jī)?nèi)容,3.通過(guò)小鼠耳蝸基底膜鋪片和耳蝸組織冰凍切片的免疫熒光觀察小鼠耳蝸與基底膜中SEC的表達(dá)情況。4.通過(guò)細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢驗(yàn)SEC與Wnt信號(hào)通路對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響從小鼠的大腦海馬區(qū)中提取出NSC細(xì)胞。將選出的NSC細(xì)胞分為5組，分別加入DMSO（control組）、低劑量Wnt激動(dòng)劑、高劑量Wnt激動(dòng)劑、低劑量SEC抑制劑、高劑量SEC抑制劑在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，一段時(shí)間后在顯微鏡下觀察細(xì)胞成球數(shù)

4、量已經(jīng)細(xì)胞團(tuán)的大小。,6,耳蝸基底膜鋪片和耳蝸組織冰凍切片,aff1、aff4、ell3在基底膜表達(dá)情況,A:基底膜的毛細(xì)胞染色圖（以myosin7a為染料） B:基底膜的細(xì)胞核染色圖（以DAPI為染料） C:基底膜的支持細(xì)胞染色圖（以SOX2為染料） D:aff4蛋白染色圖 E:合成圖,A,B,C,D,E,7,ell3,測(cè)量細(xì)胞成球大小,9,測(cè)量細(xì)胞成球大小方式,測(cè)量細(xì)胞成球大小,10,SEC抑制劑、Wnt激動(dòng)劑作用下的細(xì)胞成

5、球大小比較,NSC細(xì)胞成球大小,DMSO對(duì)照組成球情況,11,NSC細(xì)胞成球大小,高劑量Wnt激動(dòng)劑組成球情況,低劑量Wnt激動(dòng)劑組成球情況,12,NSC細(xì)胞成球大小,高劑量SEC抑制劑組成球情況,低劑量SEC抑制劑組成球情況,13,NSC細(xì)胞成球數(shù)目,14,SEC抑制劑作用下細(xì)胞成球數(shù)目變化情況,結(jié)論,SEC在耳蝸中有較高量的表達(dá)提取RNAwestern耳蝸切片Wnt激動(dòng)劑和SEC抑制劑可以分別促進(jìn)和抑制NSC增殖成球數(shù)目

6、成球大小,15,參考文獻(xiàn),[1] N.G. Bauman, Ototoxic drugs exposed : the shocking truth about prescription drugs and other chemicals that can (and do) damage our ears, 2nd ed., GuidePost Publications, Stewartstown, PA, 2003.[2] 趙靜,

7、張春雷, 房興堂, 陳宏. Wnt信號(hào)通路的研究進(jìn)展. 中國(guó)牛業(yè)科學(xué), 2012,38(1): 33-37.[3] E. Smith, C. Lin, A. Shilatifard, The super elongation complex (SEC) and MLL in development and disease, Genes Dev, 25 (2011) 661-672.[4] 尹定子, 宋海云. Wnt信號(hào)通路：調(diào)

8、控機(jī)理和生物學(xué)意義. 中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào) Chinese Journal of Cell Biology, 2011, 33(2): 103-111.[5] M. Levine, Paused RNA polymerase II as a developmental checkpoint, Cell, 145 (2011) 502-511.[6] 鄭杰夫, 任田英. 耳蝸機(jī)械學(xué). 聽(tīng)力科學(xué)概論 5: 77-80.[7] 王恬

9、. Wnt信號(hào)通路在小鼠內(nèi)耳中的表達(dá)及對(duì)具有干/祖細(xì)胞樣細(xì)胞特征的Wnt反應(yīng)細(xì)胞的調(diào)控.[8] 翟中和, 王喜忠, 丁明孝. 細(xì)胞生物學(xué)（4版）. 北京：高等教育出版社, 2011.6: 183-185. [9] M.J. Thirman, D.A. Levitan, H. Kobayashi, M.C. Simon, J.D. Rowley, Cloning of ELL, a gene that fuses to MLL