牛源結核分支桿菌(寧夏分離株)rpsL、rpoB、katG基因突變分析.pdf

1、目的：在對臨床分離的奶牛結核分支桿菌進行藥敏分析的基礎上，進一步應用分子生物學手段檢測耐藥基因，在分子水平上探討奶牛結核分支桿菌分子耐藥機制的發(fā)生、發(fā)展及其變異規(guī)律。
　　 方法：利用建立的噬菌體生物擴增法對寧夏地區(qū)奶牛結核分支桿菌臨床分離株、誘導菌株的耐藥性進行表型檢測；應用分子生物學方法對耐藥基因進行序列分析，確認本地區(qū)奶牛結核分支桿菌耐藥性及多重耐藥性的產生情況與rpsL基因、rpoB基因、katG基因的關系，并與人源結核

2、分支桿菌分子耐藥性進行對比分析；采用人工誘導法誘導牛結核分支桿菌標準株對鏈霉素產生耐藥性，應剛PCR-DS方法對誘導耐約菌株的基因突變進行檢測。
　　 結果；建立并優(yōu)化了奶牛結核分支桿菌耐藥性表型檢測方法—噬菌體生物擴增法；應用該方法對奶牛結核分支桿菌臨床分離株進行耐藥性檢測，并與絕對濃度法檢測結果對比，從25株臨床分離株中篩選出14株耐約菌株，其中12株為單耐鏈霉素、利福平、異煙肼菌株，2株為同時耐利福平和異煙肼的多重耐約株；

3、采剛PCR-DS方法對25株臨床分離株進行測序分析，12株單耐藥分離株在rpsL，rpoB、katG基因上發(fā)生了堿基突變，其中5株耐鏈霉素菌株的rpsL基因在43位點發(fā)生堿基突變。5株耐利福平菌株的rpoB基因在531位點、526位點、511位點發(fā)生堿基定點突變。2株耐異煙肼菌株，其中1株在katG基因315位點發(fā)生堿基突變，1株在463位點發(fā)生堿基突變。2株多重耐藥株的rpoB基因和katG基因同時發(fā)生了堿基突變，突變位點為rpoB基