白頭翁、黃柏及其復方提取物對小鼠腹瀉的防治作用及安全性.pdf

1、本文按照中醫(yī)理論以白頭翁、黃柏為主要方劑設計中草藥復方,研究復方及其主要方劑對大腸桿菌的體外抑制作用以及對大腸桿菌感染小鼠的體重、采食量、腹瀉和腸道微生物區(qū)系的影響,并通過最大給藥量試驗,為白頭翁、黃柏及其復方提取物的臨床應用提供依據(jù)。試驗一白頭翁、黃柏及其復方提取物的體外抑菌作用試驗采用倍比稀釋法分別測定白頭翁、黃柏、白頭翁:黃柏(1:1)和中草藥復方提取物對大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),每個濃度設3個重復

2、,進行3次重復試驗。結果顯示,各組中藥提取液對大腸桿菌的生長均有抑制作用,其中以復方的抑菌作用最為明顯,MBC為0.1250g/ml:黃柏與白頭翁:黃柏(1:1)配伍提取液的抑菌效果一致,MBC為0.2500g/ml;白頭翁的抑菌效果不明顯,表現(xiàn)為耐藥。以上結果表明,復方的抑菌作用并不是各組成成分效果的簡單相加,復方中的黃柏具有顯著的抑菌作用,其與其它單劑顯著的協(xié)同作用使復方能有效的抑制或殺滅病原菌。試驗二白頭翁、黃柏及其復方提取物對小

3、鼠腹瀉的防治作用試驗選用50只體重為18-22g的ICR小鼠,隨機分成五組:空白對照組和給藥組(復方、黃柏、白頭翁以及白頭翁:黃柏(1:1)提取液組),每組10只,雌雄各半,預試期5d,正試期13d。每天按照4g生藥/kg體重劑量定時灌胃給予放置室溫的各藥物提取液,空白對照組給予等劑量的蒸餾水。第10d每只小鼠按0.2ml/10g體重劑量腹腔注射108個/ml大腸桿菌菌液,建立小鼠細菌性致腹瀉病理模型,觀察各提取液對小鼠的腹瀉次數(shù)、稀便

4、率的影響,第13d收集糞樣,變性梯度凝膠電泳研究腸道微生物區(qū)系的變化。結果顯示,造模當天對照組的體重變化最為明顯,與其他各給藥組均差異顯著(P＜0.05),腹瀉最為嚴重;各提取液對大腸桿菌引起的腹瀉均有一定的抑制作用,其中復方的抑制效果最為明顯,與對照組相比腹瀉次數(shù)降低了51％(P＜0.05),而其他各給藥組之間差異不顯著(P＞0.05); DGGE圖譜分析顯示復方組的條帶數(shù)和多樣性指數(shù)均顯著多于其他處理組(P＜0.05),而其他各處理

5、組之間差異不顯著(P＞0.05), UPGMA相似性聚類分析則顯示各給藥組相似性系數(shù)都大于63%,且都歸于一簇(除5號),而對照組的相似性系數(shù)在56%-69%之間,個體差異較大。以上結果表明,添加中草藥可以有效降低大腸桿菌引起的小鼠腹瀉,改善小鼠腸道微生物區(qū)系,使腸道微生態(tài)更加趨于優(yōu)化和平衡,從而保證腸道菌群的相對穩(wěn)定,其中以復方提取液的作用最為明顯。試驗三白頭翁、黃柏及其復方提取物的安全性試驗選用40只體重為18-22g的ICR小鼠,

6、隨機分為四組:空白對照組和給藥組(復方、黃柏以及白頭翁提取液組),每組10只,雌雄各半,適應期5d,采用最大給藥量法進行急性毒性試驗,連續(xù)觀察7d。結果顯示,各給藥組按0.4ml/10g體重最大給藥量6h內兩次灌胃小鼠各提取液(相當于136.8g生藥/kg體重),與對照組相比,體重、采食量、血液生化指標和臟器系數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05),對其內臟器官進行組織學檢查,也均無明顯病理變化。以上結果表明,各提取液對實驗小鼠均安全無毒副作