亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴Ta18抗原重組枯草芽孢生物學(xué)活性及免疫保護(hù)效果研究.pdf

1、目的：研究已構(gòu)建成功的亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴Ta18抗原重組枯草芽孢的生物學(xué)活性。初步探索家豬口服Ta18抗原重組枯草芽孢的免疫保護(hù)效果。為研究新型高效抗絳、囊蟲(chóng)病疫苗提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：Ta18抗原重組枯草芽孢生物學(xué)活性研究：使用DSM(Difco Sporulation Medium)培養(yǎng)基，采用“耗竭法”誘導(dǎo)芽孢生成，收集芽孢；提取芽孢外殼蛋白，使用 Ta18抗血清，通過(guò)蛋白印跡（Western Blotting）、免疫熒光

2、、流式細(xì)胞儀驗(yàn)證外源蛋白在重組芽孢表面的表達(dá)；模擬胃、腸道環(huán)境，進(jìn)行枯草芽孢耐胃、腸道環(huán)境的抗性評(píng)估。對(duì)亞洲帶絳蟲(chóng)進(jìn)行形態(tài)和分子鑒定。對(duì)Ta18抗原重組枯草芽孢免疫保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)估：分離亞洲帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵，體外孵化六鉤蚴，分3組進(jìn)行體外殺傷六鉤蚴實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；設(shè)三組即重組枯草芽孢組（用Pus186-CotC-Ta18免疫）、空載體枯草芽孢組（用Pus186-CotC免疫）和常規(guī)感染組（用生理鹽水處理），口服免疫家豬，定期收集血清和糞

3、便，ELISA法檢測(cè)血清中IgG及糞便中IgA的含量變化；免疫家豬后，用亞洲帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵攻擊感染家豬，于感染后第30、40天，分批處死家豬，仔細(xì)檢查家豬體內(nèi)囊尾蚴寄生情況，計(jì)數(shù)蟲(chóng)荷;取感染家豬肝臟組織做病理切片，伊紅-蘇木素（HE）染色，觀察肝臟病變情況。
　　結(jié)果：Ta18抗原重組枯草芽孢生物學(xué)活性研究：DSM培養(yǎng)基培養(yǎng)36h誘導(dǎo)芽孢生成;提取芽孢外殼蛋白行15％SDS-PAGE，結(jié)果表明目的蛋白在芽孢表面高效表達(dá)，芽孢外殼蛋白能

4、被重組蛋白Ta18免疫的SD大鼠血清識(shí)別;使用重組蛋白特異性抗血清，免疫熒光能檢測(cè)到芽孢表面 Ta18的表達(dá);流式細(xì)胞儀能檢測(cè)到重組芽孢有特異強(qiáng)熒光光峰；枯草芽孢在模擬胃、腸道環(huán)境中活力不受影響。亞洲帶絳蟲(chóng)鑒定：經(jīng)鑒定采集的蟲(chóng)種均為亞洲帶絳蟲(chóng)。Ta18抗原重組枯草芽孢免疫保護(hù)效果研究：抗Tal8多抗血清對(duì)六鉤蚴具有明顯的殺傷作用；家豬糞便Ta18特異性IgA水平顯著高于非重組芽孢免疫組（p<0.05）。血清Ta18特異性IgG水平與非重

5、組芽孢免疫組相比差異性不顯著（p>0.05）；免疫的家豬用蟲(chóng)卵攻擊感染后，分別在第30，40天處死家豬，只在肝臟發(fā)現(xiàn)有囊尾蚴的寄生，而其他臟器和肌肉中都未檢出囊尾蚴;統(tǒng)計(jì)囊尾蚴在家豬肝臟中的寄生數(shù)量，囊蟲(chóng)數(shù)顯著減低，減蟲(chóng)率達(dá)75.4%;感染家豬肝臟病理切片顯示部分肝細(xì)胞水腫,組織內(nèi)較多嗜酸性粒細(xì)胞聚集,并出現(xiàn)嗜酸性變,囊尾蚴周?chē)写罅垦仔约?xì)胞包繞。
　　結(jié)論：Ta18在重組枯草芽孢表面具有較好的穩(wěn)定性，可大量誘導(dǎo)表達(dá)，重組芽孢能耐