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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文杜氏鹽藻（Dunaliellasalina）cDNA文庫(kù)構(gòu)建及表達(dá)序列標(biāo)簽分析姓名：張翅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：紅凌20090520II華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractDunaliellasalina，belongingtoVolvocalesakindofgreenunicellularalgaewithnocellwall.Asitcangrowinverylargesalinity
2、rangefrom0.05molLto5.5molLDunaliellasalinaisconsideredtobeamiracleofsaltresistantinautotrophiceukaryoticganisms.Withthesimplecellstructureitbecomesamodelextremophilicalgatoresearchsalttolerantmechanismsearchfsaltresistan
3、tgenes.RecentlyDunaliellasalinaasasourceoflipidssubsequentbiodieselproductionwhichcanalsofixatmosphericcarbondioxidereduceglobalwarminghasbecomeresearchfocus.Atpresent，theDunaliellasalinagenomicprojecthasnotfinishedyetth
4、ereareonlyabout3936ESTs213nucleotideintheGenbankofNCBI.Therefethegenemessageisnotenoughfthefurtherresearch.However，cDNAlibraryisanefficientmethodtoscreenanalyzevaluablegenes.BasedonsuccessfulculturingofDunaliellasalinain
5、thelabatythecellgrowthcurveat1.5molLNaClsalinitywasstudied.HighqualitycDNALibraryfromDunaliellasalinaculturedat1.5molLNaClwasconstructedbyusingTakaracDNALibraryConstructionKit.ThecDNAwassynthesizedbyMMLVwithpurifiedmRNAa
6、fterbluntingthecDNAterminiEcIAdapterswereligateddigestedbyNotIremovedtheshtfragmentbypassingspincolumnthenthecDNAwasligatedwithpAP3neovectelectropatedtheEscherichiacoliDH10BStrain.ThetiterofprimarycDNAlibrarywas1.2106cfu
7、mLtherateofrecombinantwasabove95%.ThecolonyPCRresultsshowedthatthelengthsofmostswerelargerthan500bp.BysearchingtheNCBINucleotidecollection(nrnt)Nonhuman、NonmouseESTsdatabases13of66cloningsequenceshighlyhomologoustotheDun
8、aliellasalinaESTinNCBIGenbank.thenovelESTsprobablyencodenovelgenes.ThesenovelESTslaidthefoundationffurthercloningofthesalttolerancegenesaddedmegeicinfmationfDunaliellasalina.Keywds：DunaliellasalinacDNAlibraryExpressedSeq
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