Hsa-miR-483-5p靶基因研究.pdf

1、背景和目的:MicroRNAs(miRNAs)是一類小的未編碼的RNAs,參與了基因表達的調(diào)控。Hsa-miR-483-5p存在于染色體11p15.5,定位于IGF2基因第二個內(nèi)含子上。據(jù)報道hsa-miR-483-5p的表達含量能夠用于準(zhǔn)確地區(qū)分良性和惡性腎上腺皮質(zhì)腫瘤,并且hsa-miR-483-5p的高表達預(yù)示著較低的預(yù)后生存率。然而,hsa-miR-483-5p大多數(shù)分子靶標(biāo)至今仍然沒有通過實驗得到證實。我們這個實驗的目的就是為

2、了觀察hsa-miR-483-5p的靶基因和它在人類結(jié)直腸癌中對腫瘤發(fā)生所起的作用。
　　方法和結(jié)果:為了研究hsa-miR-483-5p的靶基因,我們首先應(yīng)用生物信息學(xué)的方法進行預(yù)測。之后,根據(jù)高的預(yù)測評分,低的能量值,以及與細(xì)胞增殖的相關(guān)性,DERL1從四個候選靶基因中被選擇進行深入研究。為了進一步觀察hsa-miR-483-5p和DERL1在SW480細(xì)胞中的調(diào)節(jié)關(guān)系,我們分別轉(zhuǎn)染hsa-miR-483-5p mimics和

3、miRNA negative control入SW480細(xì)胞中。使用RT-PCR和Western blot的檢測方法,我們發(fā)現(xiàn):和陰性對照(NC)組相比,DERL1的相對表達在mRNA和蛋白水平都是被上調(diào)的,其中mRNA水平為2.0倍(p=0.0025)上調(diào),而蛋白水平是1.9倍(p=0.0353)上調(diào)。在本實驗中我們還研究了hsa-miR-483-5p在細(xì)胞增殖方面的效應(yīng)。MTT細(xì)胞增殖實驗的結(jié)果顯示:在結(jié)腸腺癌細(xì)胞系 SW480中,

4、以轉(zhuǎn)染了hsa-miR-483-5p mimics的細(xì)胞為實驗組,以轉(zhuǎn)染了miRNA Negativecontrol的細(xì)胞為陰性對照組,其細(xì)胞增值率為59.06％(p=0.0020)。
　　結(jié)論:以上數(shù)據(jù)顯示了DERL1基因是has-miR-483-5p的靶基因。在結(jié)腸腺癌細(xì)胞SW480中,hsa-miR-483-5p能夠在mRNA水平和蛋白水平上調(diào)DERL1的表達。而且,它還可以作為一個癌基因促進細(xì)胞生長,參與腫瘤的發(fā)生過程。因