急性髓系白血病M2型CD34+細胞蛋白質組學研究.pdf

1、背景與目的:
　　 急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）是一類起源于一小群異常細胞，即白血病干細胞(leukemia stem cells，LSCs)的造血系統(tǒng)惡性疾病。LSCs具有自我更新和分化的能力，是AML發(fā)生及復發(fā)的根源。然而，目前對LSCs的特性仍所知甚少。蛋白質組學是以生命功能的執(zhí)行者蛋白質為切入點，直接研究蛋白質的組成與調控。作為一種簡單、快速、高通量的技術，蛋白質組學為腫瘤發(fā)病機

2、制的研究、診治起著重要的作用。為此，本研究選擇AML-M2型白血病CD34+細胞作為研究對象，尋找AML-M2型白血病特異性/相關性蛋白分子，以探索AML-M2型白血病發(fā)病的分子機制，分子診斷和治療的靶點。
　　 方法:
　　 首先，應用免疫磁珠分選(magnetic active cell sorting，MACS)方法，從AML-M2初治患者骨髓及造血干細胞移植供者動員后的外周血中分選出CD34+細胞，并用流式細胞術

3、檢測其純度。然后，通過熒光差異雙向凝膠電泳(fluorescence two-dimensional difference in-gelelectrophoresis，2-D DIGE)分離CD34+細胞的蛋白質，并通過Typhoon掃描儀獲取凝膠圖譜，DeCyder圖像分析軟件識別差異表達蛋白質點。最后，通過質譜以及生物信息學對差異表達蛋白點進行分析。
　　 結果:
　　 經MACS分選后，用流式細胞術檢測所得細胞的純

4、度結果顯示，病人CD34+細胞純度平均為98％，正常人CD34+純度平均為92％。熒光差異雙向凝膠電泳結果表明，在正常對照與AML-M2型白血病CD34+細胞之間存在1.1倍以上差異表達的蛋白質點有25個。對這25個差異蛋白質點進一步通過質譜進行分析，得到了15個蛋白質肽指紋圖信息。生物信息學分析顯示，這些蛋白點可能代表的蛋白質包括熱休克蛋白90β、2型熱休克蛋白90α、熱休克蛋白70類似物、熱休克蛋白70-1、熱休克蛋白70-2、轉鐵

5、蛋白、血清轉鐵蛋白前體、人增殖細胞核抗原、鈣調結合蛋白、鈣網蛋白前體、丙酮酸激酶、M2型丙酮酸激酶、醛還原酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADP+)、PRO2619蛋白以及未知蛋白質分子，這些蛋白質涉及細胞能量代謝、細胞凋亡、細胞耐藥、信號轉導和細胞增殖。
　　 結論:
　　 應用MACS方法、蛋白質組學及生物信息學，本研究成功篩選出AML-M2型白血病CD34+細胞差異表達的蛋白質，這些蛋白分子可能與CD34+細胞的自我