版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導(dǎo)致白血病化療失敗的主要因為。多藥耐藥是指腫瘤細胞接觸一種抗癌藥物后產(chǎn)生的對多種結(jié)構(gòu)和功能迥異的抗癌藥物的耐受性。目前認(rèn)為它的發(fā)生機制是復(fù)雜多樣的,主要有:(1)多藥耐藥相關(guān)基因(如MDR1、MRP1、BCRP、LRP等)表達的上調(diào);(2)凋亡相關(guān)基因(如BCL-2、BCR/ABL、P53等)表達的異常;(3)酶介導(dǎo)的耐藥,包括谷光甘肽轉(zhuǎn)移酶表達升高、DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ的含量
2、或活性降低;(4)增強的DNA修復(fù)功能;(5)微環(huán)境耐藥。其中以腫瘤細胞過度表達MDR-1基因編碼的ABC轉(zhuǎn)運蛋白超家族成員膜P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp,P-170,MDR1,ABCB1)為主要的機制。黏附分子CD44是一種細胞表面跨膜糖蛋白,作為透明質(zhì)酸(HA)的受體,CD44分子的表達與白細胞的粘附、血管發(fā)生、細胞增殖、分化、遷移及淋巴細胞的活化、歸巢,以及免疫細胞的炎癥部位遷移和凝集有關(guān)。近年來,許多學(xué)者提
3、出CD44在正常髓細胞生成過程中發(fā)揮重要作用,CD44在造血細胞的過表達預(yù)示著血液惡性疾病預(yù)后不良。Vincent T等發(fā)現(xiàn)CD44分子與其受體HA之間的相互作用可能會影響惡性血液病細胞的存活及耐藥性。RNA干擾是利用雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘導(dǎo)序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(posttranscriptional gene silencing)現(xiàn)象,由于其高效性,高特異性,高穩(wěn)定性,可遺傳性及RNAi
4、在有效地沉默靶基因的同時,對細胞本身的調(diào)控系統(tǒng)沒有影響等這些特點,越來越受到人們的重視。本研究以K562/A02細胞為研究對象,以RNAi技術(shù)為平臺研究CD44基因與耐藥細胞株K562/A02耐藥性的關(guān)系,為逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥提供新的方法與思路。
目的:構(gòu)建針對CD44基因的RNA干擾表達質(zhì)粒載體,探討CD44基因表達抑制對白血病多藥耐藥細胞株K562/A02耐藥性及生物學(xué)活性的影響。
方法:根據(jù)CD44基因
5、表達序列設(shè)計有效的RNA干擾片段,將其構(gòu)建入質(zhì)粒表達空載體中,獲得針對CD44mRNA的特異性siRNA真核質(zhì)粒(pGCsiRNA-CD44),轉(zhuǎn)染K562/A02細胞。用實時熒光定量RT-PCR檢測K562/A02細胞CD44,MDR-1和BCL-2mRNA的表達;MTT法檢測阿霉素對K562/A02細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50);流式細胞術(shù)(FACS)檢測細胞周期:Hochest33258染色熒光顯微鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。
6、r> 結(jié)果:針對CD44基因的siRNA真核質(zhì)粒可有效沉默K562/A02細胞的CD44基因:與對照組相比,轉(zhuǎn)染了4條pGCsiRNA-CD44質(zhì)粒的K562/A02細胞CD44表達均明顯抑制,以轉(zhuǎn)染了siCD44-1的細胞中抑制最強。轉(zhuǎn)染pGCsiRNA-CD44質(zhì)粒48h后,K562/A02細胞CD44mRNA水平下降64.1%(p<0.05),同時MDR-1,BCL-2mRNA的表達量較對照組分別下降了25.6%,50.8%
7、;K562/A02細胞IC50為(17.97±1.61)μg/ml,無義序列質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后阿霉素對K562/A02細胞的IC50為(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44轉(zhuǎn)染后IC50明顯降低(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01)。轉(zhuǎn)染48h后,G0/G1期細胞比例提高了10.7%,細胞出現(xiàn)核固縮、核邊集、凋亡小體等改變。
結(jié)論:特異性CD44siRNA可顯著抑制K562/A02細胞CD44基因
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- DATS逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞耐藥的機制研究.pdf
- 異硫氰酸苯乙酯對K562-A02細胞耐藥逆轉(zhuǎn)的研究.pdf
- FAT逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥及其機理的研究.pdf
- 氯丙嗪對耐藥細胞株K562-A02多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf
- 1 保爾佳誘導(dǎo)人多藥耐藥株K562-A02凋亡機制研究;2 保爾佳逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥機制研究.pdf
- 川芎嗪茋類衍生物對K562-A02細胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及機制研究.pdf
- 姜黃素、紅霉素逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥機理的研究.pdf
- 雷公藤紅素逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥的實驗研究.pdf
- 納米載體裝載藤黃酸對逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥性的機制研究.pdf
- 漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞株多藥耐藥的機理研究.pdf
- 三氧化二砷誘導(dǎo)K562-A02細胞凋亡及逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥機制的研究.pdf
- K562及其耐藥株K562-A02細胞膜蛋白與耐藥機理的研究.pdf
- 甲孕酮聯(lián)合苦參堿對耐藥細胞株K562-A02多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf
- 鬼臼毒素衍生物8b逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥及其機制研究.pdf
- 益氣養(yǎng)陰解毒方含藥血清逆轉(zhuǎn)白血病K562-A02耐藥細胞的研究.pdf
- 聯(lián)合抑制sorcin和mdr1基因逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞株多藥耐藥性.pdf
- 環(huán)孢菌素A聯(lián)合雌激素受體抑制劑逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥的研究.pdf
- mdr-1 shRNA、Nef逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞MDR及增強STI571對耐藥細胞敏感性的研究.pdf
- 漢防己甲素聯(lián)合托瑞米芬逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥的研究.pdf
- 磁性納米四氧化三鐵顆粒及漢黃芩素逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥的研究.pdf
評論
0/150
提交評論