HMGB1對RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖及IL-6、IL-8、MMP-3表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討高遷移率族蛋白1(High mobility group box1 protein,HMGB1)對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)體外增殖情況及其對IL-6、IL-8、MMP-3表達(dá)的影響。
　　 方法：收集在我院行關(guān)節(jié)置換或關(guān)節(jié)鏡手術(shù)的RA患者的滑膜,采用消化酶培養(yǎng)法和組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行成FLS的原代培

2、養(yǎng),并傳代至3-6代用于實(shí)驗(yàn),免疫細(xì)胞化學(xué)檢測Vimentin鑒定FLS。分別使用不同濃度HMGB1(100、500、2000ng/ml)、LPS(100 ng/ml)、IL-1β(0.5 ng/ml)、HMGB1/IL-1β復(fù)合物(100/0.5、500/0.5、2000/0.5 ng/ml)及HMGB1/LPS復(fù)合物(100/100、500/100、2000/100 ng/ml)刺激FLS。用CCK-8法檢測FLS的增殖情況,ELI

3、SA法檢測細(xì)胞上清中IL-6、IL-8、MMP-3的濃度。
　　 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)共取RA膝關(guān)節(jié)滑膜標(biāo)本12例,原代培養(yǎng)15次,成功8次,其中用消化酶培養(yǎng)法10次,成功4次;組織塊培養(yǎng)法5次,成功4次。細(xì)胞傳至第三代時,Vimentin染色及光鏡證實(shí)為FLS。TNF-α激12h、24h、48h后FLS增殖較對照組明顯增高;不同濃度HMGB1(100、500、2000ng/ml)單獨(dú)刺激0、3、6、12、24、48h,FLS體外增殖差

4、異無統(tǒng)計學(xué)意義,IL-1β、HMGB1/IL-1β復(fù)合物、LPS、HMGB1/LPS復(fù)合物組在不同時間點(diǎn)所測FLS增殖程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組在刺激6h、24h、48h后FLS增殖情況與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。小劑量HMGB1不能刺激FLS分泌IL-6,大劑量(2000ng/ml)可顯著刺激FLS分泌IL-6;IL-1β和LPS不能促進(jìn)FLS分泌IL-6,但HMGB1與0.5ng/ml的IL-1β或100ng/ml的LPS共刺激

5、FLS可促進(jìn)IL-6的分泌,且呈劑量依賴性。不同濃度的HMGB1、IL-1β和LPS不能刺激FLS分泌IL-8;但HMGB1與IL-1β或LPS共刺激FLS可促進(jìn)IL-8的分泌,且呈劑量依賴性。不同濃度的HMGB1、IL-1β和LPS不能刺激FLS分泌MMP-3;但HMGB1與IL-1β或LPS協(xié)同刺激FLS可促進(jìn)MMP-3的分泌,且呈劑量依賴性。
　　 結(jié)論：本研究顯示,HMGB1在體外單獨(dú)作用于FLS時,無或僅有少量促炎因子