腎臟病患者非酯化脂肪酸及脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的研究.pdf

1、目的：腎病患者體內(nèi)存在脂代謝紊亂，通過(guò)血中非酯化脂肪酸的測(cè)定了解脂代謝紊亂導(dǎo)致腎臟功能受損的作用機(jī)制。通過(guò)對(duì)脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白測(cè)定，尋求慢性腎臟病早期診斷的生化指標(biāo)。
　　 慢性腎臟病也存在脂代謝紊亂，脂代謝紊亂能促發(fā)腎小球硬化和腎小管間質(zhì)損傷，與慢性腎臟疾病（CKD）的進(jìn)展有關(guān)。非酯化脂肪酸（NEFA；又名游離脂肪酸，F(xiàn)FA），作為甘油三酯（TG）的分解產(chǎn)物和合成原料，它的代謝是脂代謝過(guò)程中的重要部分。在細(xì)胞需要量增多或

2、細(xì)胞外FFA濃度過(guò)高時(shí)，F(xiàn)FA可通過(guò)蛋白和非蛋白介導(dǎo)機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞。這些FFA可用于膜的生物合成、通過(guò)β氧化產(chǎn)生能量、形成脂質(zhì)信號(hào)分子、轉(zhuǎn)錄后蛋白修飾和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。當(dāng)細(xì)胞積聚FFA超過(guò)合成和分解代謝需要時(shí)，過(guò)量脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為T(mén)G儲(chǔ)存于脂質(zhì)微滴中。脂肪細(xì)胞在胞液脂質(zhì)微滴中可儲(chǔ)存大量過(guò)多的FFA。但非脂肪組織儲(chǔ)存脂質(zhì)能力有限，當(dāng)超過(guò)其儲(chǔ)存能力時(shí)就發(fā)生細(xì)胞功能障礙或死亡稱為脂毒性（lipotoxicify）。腎病時(shí)脂質(zhì)代謝紊亂，甘油三酯增高，大量脂質(zhì)

3、在腎臟沉積，脂肪酸是否發(fā)生變化，對(duì)腎病的發(fā)生發(fā)展有何作用?鮮有報(bào)道。
　　 基于上述原因，本研究以患不同類(lèi)型的腎病患者為對(duì)象，通過(guò)了解NEFA的變化，初步探討慢性腎臟病脂質(zhì)代謝紊亂與腎功能損害的相互作用機(jī)制。通過(guò)測(cè)定血清中A-FABP，尋求一個(gè)慢性腎臟病早期診斷的生化指標(biāo)。
　　 方法：
　　 1.病例篩選及分組
　　 1.1病例篩選首先于2007年11月至2008年10月自河北醫(yī)大二院檢驗(yàn)科提取腎病內(nèi)科

4、和內(nèi)分泌科住院及門(mén)診送檢的血液標(biāo)本，并記錄病人基本信息（姓名、性別、年齡、病例號(hào)、床位號(hào)等）。其次，到病案室和門(mén)診按照病例號(hào)查找病例，記錄病人詳細(xì)信息，包括血壓、既往病史、現(xiàn)病史、家族史、病理診斷等，將信息完整的標(biāo)本一一登記，按臨床診斷及病理診斷分類(lèi)。然后，依據(jù)美國(guó)腎臟基金會(huì)慢性腎臟病及透析臨床實(shí)踐指南（K/DOQI）進(jìn)行病例篩選，篩選標(biāo)準(zhǔn)如下：首發(fā)成年病例（年齡<70歲），未經(jīng)過(guò)激素及透析治療；有病理診斷或影像學(xué)診斷的病例；無(wú)其他心、

5、肺、肝等重大疾患；無(wú)其他內(nèi)分泌代謝性疾?。粺o(wú)高血壓、過(guò)敏性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等導(dǎo)致腎損害。糖尿病病例篩選標(biāo)準(zhǔn)：門(mén)診檢出的Ⅱ型糖尿病病人（年齡<70歲）；無(wú)任何糖尿病并發(fā)癥；無(wú)其他心、肺、肝、腎等重大疾患；無(wú)其他內(nèi)分泌代謝性疾病。對(duì)照組篩選標(biāo)準(zhǔn)：門(mén)診查體的健康成年人（年齡<70歲）；無(wú)心、肺、肝、腎等疾患；無(wú)甲亢等代謝性疾?。粺o(wú)高血壓、高血脂和高血糖；無(wú)乙型肝炎、丙型肝炎等傳染性疾病。
　　 1.2標(biāo)本分組：103份病人血清標(biāo)本

6、中，原發(fā)性腎小球腎炎49例，43例有病理診斷，6例有影像學(xué)診斷。本研究將其中臨床表現(xiàn)符合腎病綜合征的23例另列為腎病綜合征組。糖尿病腎病14例，3例有病理診斷，11例有影像學(xué)診斷。糖尿病40例。因此，本研究設(shè)計(jì)分為五組①原發(fā)性腎小球腎炎組（PGN組），26例；②腎病綜合征組（NS組），23例；③糖尿病腎病組（DN組），14例；④糖尿病組（DM組），40例；⑤對(duì)照組（Con組），23例。
　　 2.銅顯色法測(cè)定血清非酯化脂肪酸（N

7、EFA）總量。
　　 3.ELISA方法測(cè)定各組血清脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（A-FABP）。
　　 4.紫外-谷氨酸脫氫酶法測(cè)血清尿素氮（BUN）。用7170全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。
　　 5.堿性苦味酸法測(cè)血肌酐（CRE）。用7170全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。
　　 6.雙縮脲比色法測(cè)血清總蛋白（TP）。用7170全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。
　　 7.溴甲酚綠法測(cè)血清白蛋白（ALB）。用7170全自動(dòng)生

8、化分析儀測(cè)定。
　　 8.在7171全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定的其它生化指標(biāo)
　　 8.1酶法測(cè)定血清甘油三酯（TG）。
　　 8.2膽固醇氧化酶終點(diǎn)法測(cè)定血清膽固醇（CHO）。用7170全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。
　　 8.3勻相測(cè)定法測(cè)定血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-CHO）。用7170全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。
　　 8.4葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血糖（FBG）。
　　 結(jié)果：
　　 1

9、.非酯化脂肪酸（NEFA）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組和Con組NEFA值，依次為1.01±0.14mmol/L、1.01±0.11mmol/L、1.04±0.07mmol/L、0.90±0.24 mmol/L和0.83±0.26mmol/L.PGN組、NS組、DN組NEFA值均高于Con組。DM組NEFA值與Con組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與使用降糖藥物控制血糖接近于正常范圍有關(guān)。
　　 2.脂肪細(xì)胞型脂肪

10、酸結(jié)合蛋白（A-FABP）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組和Con組A-FABP值，依次為8.20±2.93ng/ml、8.35±3.19ng/ml、6.05±1.91ng/ml、5.62±2.07ng/ml和4.27±2.06ng/ml，四個(gè)病理組A-FABP值均高于Con組。慢性腎臟病早期，尿素氮、肌酐僅輕度增高，A-FABP也同時(shí)增高，尤其在原發(fā)性腎臟疾病血A-FABP升高更為顯著，約為對(duì)照組的兩倍左右。提示與傳統(tǒng)

11、的腎病指標(biāo)尿素氮、肌酐相比，A-FABP可能對(duì)慢性腎臟病尤其是原發(fā)性腎臟疾病更有早期診斷價(jià)值。
　　 3.尿素氮（BUN）
　　 PGN組、NS組、DN組的BUN值均高于Con組。DM組和Con組相比，血BUN無(wú)明顯差異。表明所選慢性腎臟病病例腎功能有輕微損害，但均處于腎功能代償期。
　　 4.肌酐（CRE）
　　 PGN組、NS組、DN組的CRE值均高于Con組。DM組和Con組相比，血CRE無(wú)明顯差異

12、。表明所選慢性腎病病例腎功能有輕微損害，但CRE均值均低于178μmol/L，均處于腎功能代償期。
　　 5.總蛋白（TP）
　　 PGN組、NS組和Con組相比，TP明顯降低。DN組TP值也低于Con組，DM組高于正常對(duì)照組。表明，慢性腎病時(shí)存在低蛋白血癥。糖尿病組總蛋白高出對(duì)照組，可能是糖尿病時(shí)球蛋白增高引起，有待研究。
　　 6.白蛋白（ALB）
　　 PGN組、NS組、DN組ALB值明顯低于Con

13、組，DM組與Con組無(wú)差異。表明，原發(fā)性腎小球腎炎、腎病綜合癥和糖尿病腎病的低蛋白血癥主要表現(xiàn)在血中白蛋白的降低。糖尿病組在未繼發(fā)腎病前不存在低白蛋白血癥，和總蛋白結(jié)果綜合提示糖尿病時(shí)血中球蛋白可能增高，有待研究。
　　 7.甘油三酯（TG）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組甘油三酯值均高于Con組。表明慢性腎臟病時(shí)患者體內(nèi)存在脂代謝紊亂。
　　 8.膽固醇（CHO）
　　 NS組CHO值高于Con

14、組。余三組CHO值與Con組相比無(wú)明顯差異。結(jié)果支持腎病綜合征的臨床診斷。
　　 9.高密度脂蛋白膽固醇（HDL-CHO）
　　 PGN組、DN組、DM組HDL-CHO值低于Con組。NS組HDL-CHO值與Con組相比無(wú)顯著差異。表明慢性腎病時(shí)脂代謝紊亂確實(shí)存在。腎病綜合征患者HDL-CHO與CHO相比處于相對(duì)減低水平。
　　 10.空腹血糖（FBG）
　　 PGN組、NS組和Con組相比，F(xiàn)BG無(wú)明顯

15、差異。DN組和DM組FBG值均高于Con組。表明，糖尿病和糖尿病腎病的血糖高于正常組，支持臨床診斷。
　　 11.A-FABP與NEFA相關(guān)分析結(jié)果
　　 通過(guò)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，A-FABP與NEFA之間存在弱相關(guān)關(guān)系。PGN組、NS組和DM組內(nèi)兩指標(biāo)有直線相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.446，R=0.469，0.374。DN組未檢出二者有相關(guān)關(guān)系，可能與組內(nèi)病例例數(shù)較少有關(guān)。同上述總蛋白、白蛋白結(jié)果分析腎病時(shí)存在低白蛋白血癥

16、，血中NEFA卻增高，血中A-FABP與NEFA存在相關(guān)關(guān)系，提示腎病時(shí)血中A-FABP可能與NEFA結(jié)合參與胞外的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。
　　 結(jié)論：
　　 1.NEFA在慢性腎臟病早期就有增高，提示慢性腎臟病早期NEFA對(duì)腎臟已經(jīng)產(chǎn)生脂毒性作用，可能與慢性腎臟病的進(jìn)展有關(guān)。
　　 2.本研究認(rèn)為慢性腎臟病早期，尤其是原發(fā)性腎臟疾病早期血清A-FABP水平顯著升高，且靈敏度高于傳統(tǒng)腎病診斷指標(biāo)BUN、CRE，提示血A