E1A基因對宮頸癌裸鼠移植瘤放射敏感性影響的實驗研究.pdf

1、目的： 1.探討E1A基因對宮頸癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影響及相關機制。 2.為提高宮頸癌的放射治療療效提供實驗依據(jù)，并為腫瘤的基因治療提供初步理論依據(jù)。 方法： 細胞培養(yǎng)：人宮頸癌HeLa細胞在37℃，5﹪CO2條件下培養(yǎng)于含10﹪小牛血清，RPMI-1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶，將對數(shù)生長期的人宮頸癌HeLa細胞接種于裸鼠右側肩胛下皮下，每只接種2×10<'6>個細胞，建立裸鼠移植瘤模型。每日觀察腫瘤生長情

2、況，每三天測量一次腫瘤的長短徑，計算腫瘤體積，V=1/2×(ab<'2>)。分組處理：待每組腫瘤平均直徑約10mm時，隨機將裸鼠分為三組，E1A實驗組：瘤內(nèi)注射EIA質粒與PEI-Fe<,3>O<,4>納米粒的膠體溶液0.2ml：空載體對照組：瘤內(nèi)注射PEI-Fe<,3>O<,4>納米?？蛰d體0.2ml：空白對照組：瘤內(nèi)注射無菌生理鹽水0.2ml。兩天后開始放療：將每組裸鼠分別進行照射，6-MV X-ray源皮距100cm 2Gy/次×

3、5天，劑量率2Gy/min，總劑量10Gy，每天觀察腫瘤縮小情況，同樣每三天測量一次腫瘤體積，處死前測瘤體積，算出每組腫瘤縮小率=(放療前平均瘤體積-放療后平均瘤體積)/放療前平均瘤體積；處死裸鼠取標本稱瘤重，算出各組平均瘤重。標本制成病理切片，TUNEL法測瘤組織中細胞凋亡情況，計算每組的凋亡指數(shù)；免疫組化測survivin蛋白表達。 結果： 1.接種HeLa細胞后第7天開始成瘤，至第12天成瘤率達100﹪。

4、2.照射前E1A組，納米粒空載體組，空白對照組腫瘤體積分別為：302.28±37.48 mm<'3>，326.57±57.34 mm<'3>，317.95±86.93mm<'3>，照射結束后，處死裸鼠前E1A組，納米?？蛰d體組，空白對照組腫瘤體積分別為46.50±29.04 mm<'3>，222.4±37.47mm<'3>，202.83±67.51mm<'3>，腫瘤縮小率分別為84.62±14.25﹪，31.90±8.42﹪，36.21

5、±7.76﹪。瘤重分別為：148.1±69.7mg，434.9±38.7mg，394.3±88.6mg，E1A組腫瘤縮小率明顯高于對照組，瘤重明顯低于對照組，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，空載體組與空白對照組比較無明顯差異(p>0.05)。 3.TUNEL法測不同組中細胞凋亡情況，E1A組中凋亡細胞明顯多，凋亡指數(shù)為32.07±4.48﹪，而空載體組及空白對照組中凋亡細胞明顯少，分別為13.93±1.31﹪，14.02±0.98