B16黑色素瘤高低轉(zhuǎn)移株篩選及其侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制.pdf

1、該研究在用體內(nèi)法篩選出B16M高低轉(zhuǎn)移株的基礎(chǔ)上,運用實驗性和自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移模型驗證所篩選的不同B16M細(xì)胞在體內(nèi)生長、轉(zhuǎn)移情況.用細(xì)胞生物學(xué)手段如細(xì)胞增殖、<'3>H-TdR摻入實驗、流式細(xì)胞儀技術(shù)、細(xì)胞侵襲離散實驗研究了高低B16M細(xì)胞株體外增殖能力、細(xì)胞周期、對離散因子的反應(yīng)及侵襲能力的差異.隨后用Northern雜交、RT-PCR、Western印跡、及凝膠酶譜分析技術(shù)研究了B16M高低轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制.結(jié)果發(fā)現(xiàn),在所篩選出的三株

2、可疑高轉(zhuǎn)移B16M細(xì)胞株中,有一株(H3B16M)細(xì)胞在接種于同系C57BL/6體內(nèi)所形成的原發(fā)瘤重量、血道和自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯高于其他細(xì)胞株.說明H3B16M的生長、轉(zhuǎn)移能力最強(qiáng).同時發(fā)現(xiàn)在相同的培養(yǎng)條件下,體外培養(yǎng)4-5d的H3B16M細(xì)胞數(shù)明顯多于其他細(xì)胞株,其<'3>H-TdR摻入最多,細(xì)胞周期中靜止期(S期)細(xì)胞明顯減少,G2-M期細(xì)胞增多.H3B16M還對SF的離散性反應(yīng)明顯加強(qiáng),透過聚碳酯膜的細(xì)胞明顯增加.也說明H3細(xì)

3、胞株體外的增殖、離散侵襲能力較強(qiáng).機(jī)制探討時發(fā)現(xiàn)H3細(xì)胞上c-met、ETS、VEGFR在mRNA及蛋白水平上均表達(dá)增加.SF/c-met下游兩條主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的兩個關(guān)鍵分子ERK、AKT磷酸化水平增強(qiáng),基質(zhì)金屬蛋白激酶(MMP2/9)活性明顯增強(qiáng).實驗中也發(fā)現(xiàn)了IL-18、TEC、鈣磷脂結(jié)合蛋白1(ANNINEX1)在H3細(xì)胞株中表達(dá)增加,NM23表達(dá)減少的現(xiàn)象,提示可能因為c-met表達(dá)增加,其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑MAPK/PI3K