人骨肉瘤細胞系與人正常成骨細胞系的比較蛋白質(zhì)組學的研究.pdf

1、目的：對人骨肉瘤細胞系與人正常成骨細胞系的總蛋白質(zhì)進行比較蛋白質(zhì)組學的研究。
　　方法：通過對人骨肉瘤細胞系MG-63與人正常成骨細胞系hFOB1.19的體外培養(yǎng)后提取總蛋白進行雙向電泳,篩選兩者差異蛋白質(zhì),利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOFMS)鑒定相關(guān)蛋白質(zhì),再利用經(jīng)典分子生物學方法(western-blot)進行體內(nèi)驗證,檢測波形蛋白在人骨肉瘤組織中的表達量。
　　結(jié)果：1.二維凝膠電泳分

2、離顯示兩組間差異存在2倍及以上的蛋白點有73個,其中上調(diào)的蛋白點有50個,下調(diào)的差異蛋白點有23個,選擇其中差異較顯著的12個點行MALDI-TOF/TOFMS質(zhì)譜分析,共檢測出8種蛋白,其中通過質(zhì)譜分析的結(jié)果和生物信息學的分析波形蛋白可能為骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的蛋白結(jié)點,并用分子生物學方法western-blot給予體內(nèi)驗證。2.體外培養(yǎng)細胞系與人體組織存在差異性,因此由體外細胞系分離得出的蛋白質(zhì)組學的結(jié)果需要在人體內(nèi)組織標本中進行驗證。對

3、骨肉瘤組織和癌旁組織進行western-blot體內(nèi)驗證,分析波形蛋白在骨肉瘤組織組(n=7)和癌旁組織對照組(n=7)中的表達,采用兩樣本t檢驗進行統(tǒng)計學分析,骨肉瘤標本中波形蛋白的表達強度顯著高于對照組。
　　結(jié)論：本課題嘗試利用雙向電泳技術(shù)、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜鑒定技術(shù)相結(jié)合的方法研究人類骨肉瘤細胞系與正常成骨細胞系蛋白質(zhì)組之間的差異,并對差異蛋白波形蛋白進行了western-blot體內(nèi)驗證,得出結(jié)論如下:

4、r>　　1.經(jīng)雙向電泳技術(shù)及基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜鑒定技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用可實現(xiàn)人類骨肉瘤細胞系與人正常成骨細胞系差異蛋白質(zhì)的鑒定,這些蛋白質(zhì)可能參與了細胞內(nèi)外物質(zhì)交換、細胞識別、代謝調(diào)節(jié)、免疫應(yīng)答等重要生物學活動。
　　2.對差異蛋白波形蛋白進行western-blot體內(nèi)驗證,得到了與基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析一致的結(jié)果,說明了我們對人骨肉瘤細胞系與人正常成骨細胞系的比較蛋白質(zhì)組學的研究結(jié)果可信,波形蛋白在人骨肉