中國野生華東葡萄VpCN基因轉(zhuǎn)化歐洲葡萄無核白的研究.pdf

1、葡萄（Vitis spp.）是世界上重要的經(jīng)濟(jì)水果，尤其是歐洲葡萄（Vitis vinifera L.）品質(zhì)好、風(fēng)味純正、產(chǎn)量高，在世界葡萄栽培中占據(jù)著重要位置。但是，由真菌病害引起的白粉病給歐洲葡萄的生產(chǎn)和銷售帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對歐洲葡萄進(jìn)行定向遺傳改良是解決這一問題的有效途徑。中國野生華東葡萄白河-35-1對白粉病具有很強(qiáng)的抗性，挖掘中國野生葡萄種質(zhì)資源相關(guān)抗病基因和研究其功能對葡萄抗病育種具有重要的意義。課題組前

2、期克隆到中國野生華東葡萄白河-35-1抗白粉病相關(guān)基因VpCN，轉(zhuǎn)化擬南芥表現(xiàn)出對白粉病抗性。本研究為進(jìn)一步驗(yàn)證該基因功能，建立5種葡萄體細(xì)胞胚胎再生途徑，并以葡萄原胚團(tuán)為受體材料，與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)，將VpCN基因轉(zhuǎn)入感白粉病的歐洲葡萄品種無核白，為改良?xì)W洲葡萄品種抗病性提供理論依據(jù)。具體內(nèi)容及取得的成果如下:
　　1、誘導(dǎo)得到紅地球、無核白、赤霞珠、商-24、塘尾等5種葡萄的胚性愈傷組織以及體細(xì)胞胚。以紅地球、無核白、赤霞珠、商-

3、24、塘尾的花藥、子房以及小花蕾為外植體，在MC、MS1、DM培養(yǎng)基上誘導(dǎo)，得到胚性愈傷組織。無核白花藥在MC培養(yǎng)基（NN69+30g/L蔗糖+2.5uM2，4-D+2.5uM NOA+5.0uM4-CPPU+0.1g/L肌醇+7g/L TC瓊脂）上誘導(dǎo)效率最高，為24.00％。X6培養(yǎng)基（MS+60g/L蔗糖+7g/L TC瓊脂）比NB培養(yǎng)基更適合體胚的誘導(dǎo)。
　　2、通過體細(xì)胞胚途徑獲得了無核白葡萄的再生株系，DM培養(yǎng)基（DK

4、W+30g/L蔗糖+2.5uM2，4-D+5.0uM6-BA+2.5uM NOA+1.0g/L肌醇+7g/L TC瓊脂）更適合用于次生胚性愈傷的誘導(dǎo)。
　　3、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將攜帶VpCN基因的植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入歐洲葡萄無核白葡萄的原胚團(tuán)中，得到無核白葡萄的抗性胚。而且，原胚團(tuán)比體細(xì)胞胚更適用于無核白葡萄遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料。
　　4、構(gòu)建VpCN的亞細(xì)胞定位載體pBI221-VpCN-GFP，通過農(nóng)桿菌侵染將融合載體導(dǎo)入洋