Gleevec對人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG生長抑制作用的實驗研究.pdf

1、本文分四部分論述了Gleevec對人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG生長抑制作用的實驗研究。 第一部分Gleevec抑制人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG生長的體外實驗研究。 目的：觀察Gleevec對體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG是否具有抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學機制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細胞，用MTT法和集落形成試驗檢測Gleevec的細胞生長抑制作

2、用；用流式細胞儀檢測Gleevec對細胞周期分布的影響；將細胞分成三組：對照組、gleevec8uM處理12小時組、gleevec8uM處理24小時組，用免疫熒光定量RT-PCR技術檢測各組的B觚、P21、Rad51mRNA的表達變化。 結果：MTT法和集落形成試驗均發(fā)現(xiàn)Gleevec能抑制SF767、T98MG細胞生長，有良好的量效關系。其IC50值8uM左右；流式細胞術顯示細胞周期阻滯于G1期，未見凋亡：RT．PCR結果表明

3、Gleevec作用于SF767、T98MG，Rad5lmRNA表達下調(diào)，P21mRNA表達上調(diào)。 結論：Gleevec能抑制SF767、T98MG細胞的體外生長，細胞周期阻滯是其細胞學機制，P2l、R甜51mRNA的表達改變可能參與了其中的分子生物學機制。 第二部分Gleevec和順鉑聯(lián)合抑制人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG生長的體外實驗研究。 目的：觀察Gleevec和順鉑(DDP)對體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤

4、細胞株SF767、T98MG是否具有聯(lián)合抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學機制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細胞，用MTT法檢測DDP和Gleevec與DDP聯(lián)用的細胞生長抑制作用；用流式細胞儀檢測Gleevec與DDP聯(lián)用對細胞周期分布的影響；將細胞分成三組：對照組、Gleevec組和Gleevec+DDP組，用免疫熒光定量RT．PCR技術檢測各組的Bax、P21、Rad51mRNA的表達變化。 結果

5、：MTT結果顯示DDP對SF767和T98MG有抑制作用，T98MG對DDP的敏感性(IC50略大于12．5ug/m1)低于SF767(IC50=6．25ug/m1)，SF767在聯(lián)合使用gleevec8uM和順鉑6．25ug/m148小時后出現(xiàn)協(xié)同效應；流式細胞術顯示細胞周期阻滯于G1期；RT—PCR結果表明GkeVec與順鉑聯(lián)用引起P2l、Bax、Rad51mRNA升高，聯(lián)合作用24小時的Rad51mRNA的表達在SF767中比T9

6、8MG弱。 結論：G1eevec和順鉑聯(lián)合抑制SF767有協(xié)同效應，細胞周期阻滯是其細胞學機制，R甜5l、P21和B觚可能在Gleevec與順鉑對SF767細胞的協(xié)同抑制效應中起一定作用，Rad51介導的DNA修復減弱可能起主要作用。 第三部分GIeevec和放射聯(lián)合抑制人腦膠質(zhì)瘤細胞株sF767、T98MG生長的體外實驗研究。 目的：觀察Gleevec聯(lián)合放射對體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細胞株SF767、T98MG是

7、否具有聯(lián)合抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學機制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細胞，集落形成試驗檢測gkevec對T98MG、SF767細胞的放射敏感作用，用流式細胞儀檢測G1eevec與放療聯(lián)用對細胞周期分布的影響；將細胞分成五組：對照組、放射10Gy12小時組、放射10Gy24小時組、gleevec8uM預處理12小時+放射組、gleevec8uM預處理24小時+放射組。用免疫熒光定量RT-PCR技術檢測各

8、組的B觚、P2l、R甜51m對RNA的表達變化。細胞免疫化學染色觀察R砌51foci的形成。 結果：集落形成法實驗結果繪制的存活曲線及相關參數(shù)顯示，放射+藥物組各個參數(shù)都相應小于單放組，單放組DO值分別是放射+藥物組的1．28倍(SF767)和1．22倍(T98MG)。放射+藥物組和單放組相比，放射+藥物組和G1eev∞組相比，Gl相細胞均減少，而G2／M相細胞明顯增加。G1eevec預處理后照射T98MG、SF767，兩細胞株

9、的P2l、BaxmRNA表達量均有升高，R甜5lmRNA表達量下降。在SF767細胞，2Gy照射和Gleevec預處理后照射2Gy形成的Rad51foci分別為25％和16％。而T98MG細胞在2Gy照射和Gleevec預處理后照射2Gy形成的Rad5lfoci分別為21％和15％。 結論：Gleevec能增強SF767、T98MG的放射敏感性，G2／M相細胞明顯增加可能是放射增敏的細胞機制，Rad5l下調(diào)和P21上調(diào)可能是放射

10、增敏的分子機制。 第四部分GIeevec抑制裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤生長的體內(nèi)實驗研究。 目的：觀察Gleevec是否能抑制裸鼠荷sF767膠質(zhì)瘤的生長，并探討其內(nèi)在的分子生物學機制。方法將SF767細胞接種于裸鼠皮下建立動物模型，分成兩組：治療組腹腔注射aeevec，對照組注射PBS液，測量腫瘤大小變化；移植瘤做成石蠟切片，用免疫組化檢測兩組腫瘤中PDGFRa、β的表達，用TUNEL法檢測腫瘤標本的凋亡情況。 結

11、果：治療組腫瘤生長速度明顯緩于對照組；至第30天兩組裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤體積分別為治療組033±O．14cm。，對照組0．77±0．40cm3；重量分別為治療組O．40±O．20g，對照組O．81±O．42g，兩組間體積和重量均有明顯差異；治療組PDGFRα的強陽性表達率低于對照組，兩組間PDGFRB的表達無明顯差異；TUNEL染色未見凋亡。 結論：Gleevec能抑制裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤的生長，主要機制為抑制PDGFRa，