HSP70多肽復(fù)合物的純化及其負(fù)載樹突狀細(xì)胞抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：建立從腫瘤細(xì)胞中分離純化熱休克蛋白70(HSP70)多肽復(fù)合物的方法，探討其負(fù)載樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DC)在體外的抗腫瘤作用。 方法：熱處理人胃癌細(xì)胞SGC，制備細(xì)胞裂解液，用肝素-Sepharose柱、DEAE-Sepharose柱和ADP-Agarose柱進(jìn)行序貫分離，所得的蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳及Westernblot鑒定分析。Bradford法測(cè)定蛋白的得率。聯(lián)合應(yīng)用粒/巨細(xì)胞集落刺激因子(

2、GM-CSF)及白介素-4(IL-4)從外周血單個(gè)核細(xì)胞中培養(yǎng)DC，用提純的HSP70多肽復(fù)合物負(fù)載DC，流式細(xì)胞儀檢測(cè)負(fù)載前后DC表型的變化，用HSP70多肽復(fù)合物負(fù)載的DC誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫活性細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增值及免疫活性細(xì)胞對(duì)SGC、BGC和CW-2的殺傷作用。 結(jié)果：純化的蛋白經(jīng)鑒定確為相對(duì)分子量72KD的HSP70多肽復(fù)合物，從1克濕重細(xì)胞中可獲取56.36ug的HSP70多肽復(fù)合物。利用GM-CSF

3、及IL-4可從外周血單個(gè)核細(xì)胞中獲取DC，HSP70多肽復(fù)合物可促進(jìn)DC的成熟，表現(xiàn)為DC表面分子HLA-DR、CD83、CD86表達(dá)升高。由SGC中提純HSP70多肽復(fù)合物負(fù)載DC激活淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫活性細(xì)胞，僅對(duì)SGC有特異性的殺傷作用，而對(duì)BGC和CW-2無(wú)特異性的殺傷作用。 結(jié)論：用上述蛋白層析法可分離出高純度，保留腫瘤抗原信息的HSP70多肽復(fù)合物；體外經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)獲取的DC經(jīng)HSP70多肽復(fù)合物負(fù)載后，在體外可激活