不同保存方式對嗅鞘細胞活性的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是臨床常見多發(fā)病,其致殘率高,發(fā)病率逐年攀升,在眾多療法中,嗅鞘細胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植的療效最佳。臨床移植的細胞源于流產(chǎn)胎兒的嗅球,其來源少,時間、地點不確定,而需要臨床移植治療的SCI病人亦同樣存在時間、地點不固定等問題。流產(chǎn)胎兒的嗅球需要及時取材培養(yǎng),因OECs不能無限傳代,且在培養(yǎng)過程中極易受成纖維等

2、雜細胞的污染,培養(yǎng)10-14天即需移植,因此,細胞培養(yǎng)與臨床移植間存在時間和區(qū)域差,極大限制了其臨床應用。因OECs來源少,為有效利用資源,造福更多脊髓損傷患者,需幫助OECs安全地度過時間和區(qū)域差,因此細胞的保存非常重要。本試驗的目的是探討OECs長期保存的最佳方式及OECs保存的時限等問題,為臨床應用提供理論依據(jù)。
   材料與方法
   取2.0個月齡雄性健康Wistar大鼠的嗅球,進行OECs培養(yǎng),收集對數(shù)生長期

3、細胞,隨機分為五組,A組和D組:1號凍存液懸?。籅組和E組:2號凍存液懸?。籆組:3號凍存液懸?。?0%DMSO、5%DMSO-6%HES、5%DMSO分別為1、2、3號凍存液的低溫保護劑)。A組、B組、C組采用冰箱降溫液氮保存方式;D組和E組采用程控降溫儀降溫液氮保存方式。標本保存一月、三月和半年后復蘇,鏡下觀察復蘇標本的細胞形態(tài),行MTT比色法、臺盼藍染色法(TBR)檢測標本活性,各指標均行組間組內(nèi)對比。
   結(jié)果:

4、>   鏡下見5%DMSO-6%HES組標本復蘇細胞胞體透光度和立體感較好,皺縮細胞及裂解細胞碎片少,細胞貼壁和增殖較快;5%DMSO組易見皺縮細胞和細胞碎片,胞體透光度和立體感差的細胞數(shù)量多,細胞貼壁時間長且增殖慢;而10%DMSO組居于二者之間。
   標本保存一月、三月及半年后復蘇,其中:1.同種保存方式下,組內(nèi)差異不顯著(P>0.05);2.同種低溫保護劑下,冰箱降溫液氮保存與程控降溫儀降溫液氮保存相比,差異不顯著(P

5、>0.05);3.不同低溫保護劑下,5%DMSO-6%HES組細胞的活性比10%DMSO組好,差異顯著(P<0.05);10%DMSO組比5%DMSO組好,差異顯著(P<0.05)。
   冰箱降溫液氮保存三月,復蘇細胞繼續(xù)培養(yǎng)5天檢測,B組細胞的活性比A組和C組均好,差異顯著(P<0.05);A組比C組好,差異顯著(P<0.05)。
   1、2和3號凍存液隨機分組懸浮OECs,室溫放置2小時后檢測,每組細胞的活性均有

6、下降,10%DMSO組明顯低于另兩組,差異顯著(P<0.05);而后兩組差異不顯著(P>0.05)。
   標本低溫保存半年后復蘇,細胞不再洗滌,繼續(xù)存于原凍存液內(nèi),室溫下放置不同時間,每組細胞活性均下降,以10%DMSO組影響最大。
   結(jié)論:
   1.選取OECs凍存液時,主張使用5%DMSO-6%HES作為低溫保護劑;
   2.對于小樣本OECs的保存,選用冰箱降溫液氮保存方式;
  

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